Purificacion De Gamma Globulinas Por Precipitacion Con Sulfato De Amonio

PURIFICACION DE GAMMA GLOBULINAS POR PRECIPITACION CON SULFATO DE AMONIO
Objetivos: se efectuara la purificación de gamma globulina por precipitación con sulfato de amonio a una saturación final de33%. La gamma globulina obtenida se utilizara para inmunizar conejos
Tiselius y Kabat demostraron que la actividad de anticuerpos esta principalmente presente en la fracción gamma de las proteínasdel suelo.
Los anticuerpos pueden purificarse por métodos específicos e inespecíficos.
Métodos específicos: se basan en la propiedad que tienen los anticuerpos para reaccionar con sus antígenos. Asíos anticuerpos pueden ser precipitados por la adición del antígeno en estado soluble.
Cromatografía de afinidad. Purificación de antígeno especifico.
Métodos inespecíficos de acuerdo a laspropiedad fisicoquímicas de de los anticuerpos.
-SOLUBILIDAD
Precipitación con sales como etanol, sulfato de amonio, sulfato de sodio
Precipitación con solventes (se puede contaminar por la gran cantidadde albumina, después de realizar una reacción enzimática)
Cromatografía de intercambio iónico: separación de proteínas, de acuerdo a las cargas que presenta la molécula. Resina de intercambio iónicoa cationico para purificación de IgG punto isoeléctrico, carga neutra.
Tamices moleculares o exclusión molecular: de acuerdo al tamaño que tiene cada proteína. Purificación de IgM
Técnicas deelectroforesis: tamaño y carga, con diversos soportes (papel, acetato de celulosa, gel de almidón, poliacrilamida, etc.)
Purificación de gamma globulina con la precipitación de sulfato de amonio a unaconcentración final de 33%. Con tres precipitaciones se considera yb alto grado de pureza.
SALTING OUT
Las moléculas de agua que solventan a la molécula de anticuerpo son desplazadas por iones sulfatoy amonio, que además neutralizan los grupos cargados de la proteína, con lo que se solubiliza y precipita.

El sulfato de amonio, altamente hidrófilica, interacción a con el agua y retira el agua...