Purificacion de proteinas por el metodo de salting out

Seminario Medico-Farmacéutico
Dr. Jesús Hernández Romano | Morales Miriam, Litwinzack Sergio, Padrón Luis, Serrano Angélica. |

Práctica #3 | Purificación de Proteínas por el método de SaltingOut |

Introducción

Una condición esencial para el estudio de la estructura y función de una proteína es su purificación, generalmente de un tejido que contiene miles de proteínas que difierenen tamaño, forma y carga. Los aspectos que deben considerarse para establecer un método de purificación de una proteína son: el uso, las características (tamaño, carga, solubilidad, hidrofilicidad yfunción biológica), la cantidad que se requiere purificar y el costo. Por lo tanto, no hay un procedimiento único para la purificación de proteínas, no obstante, si hay una forma sistemática en la quese puede realizar. Una guía básica para la purificación de una proteína toma en consideración lo siguiente:

- Definir los objetivos de la purificación. Grado de pureza, cantidad y nivel deactividad requeridos.
- Seleccionar la muestra biológica de inicio. Dependerá de la localización de la proteína tanto en tejidos como en compartimentos extracelulares o intracelulares.
- Desarrollar unatécnica de análisis. Para la determinación rápida de la pureza, actividad o contenido total de proteína. Un método frecuentemente utilizado para evaluar la pureza es la separación de la proteínamediante electroforesis.
- Minimizar la manipulación de la muestra. Evitar los procedimientos largos, ya que se corre el riesgo de perder la actividad de la proteína o reducir el rendimiento.
- Removeral inicio del proceso los posibles contaminantes. Por ejemplo las proteasas.
- Reducir el uso de aditivos. El uso de muchos y diversos aditivos como sales y amortiguadores en cada paso, puedellevar a la pérdida de la actividad de la enzima y aumentar los costos de la purificación. Seleccionar y usar sólo lo necesario.
- Usar una técnica diferente en cada paso. Para ello tomar en cuenta las...