Purificacion de una enzima

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Microbiología y Parasitología
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE
SAN MARCOS
“Universidad del Perú, decana de América”
Año de la calidad educativa

purificación de una enzima utilizando el programa protein.ms-dos

salazar dávila, Carlo César
Departamento de Bioquímica, facultad de Ciencias Biológicas
Profesoras: Dra. Beatriz Lizárraga y Dra.Patricia Woll
09100036@unmsm.edu.pe

RESUMEN
En esta sesión se utilizará un programa de ordenador, PROTEIN, que simula el proceso de purificación de 20 enzimas diferentes.
Cada enzima se identifica con un número del 1 al 20. Elegiremos para este caso la enzima representada por el número 3.
A continuación nos indican una serie de características generales de la enzima: estabilidad térmica,estabilidad frente al pH, etc. Esta información nos será útil para diseñar las primeras etapas del proceso de purificación. Es posible elegir entre las siguientes técnicas de separación: tratamiento con calor, precipitación con sulfato de amonio, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de filtración en gel, cromatoenfoque, etc.
Nuestro objetivo es purificar a homogeneidad (sin ningunaotra enzima contaminante) la enzima Nº 3 contenida en el material de partida. Para ello, a partir de una muestra determinada se irán realizando secuencialmente las pruebas indicadas en la descripción del programa, variando las condiciones de cada ensayo para optimizar la purificación de la proteína problema.

Palabras clave: Enzima, purificación, PROTEIN
ABSTRACT
It will be used for thissession a computer programme, called PROTEIN, which simulate 20 different enzymes’ purification process.
All these enzymes must be identified with number from 1 to 20. We will choose in this case the enzyme which is been identified as number 3.
To continue with the process we have been explained loads of general characteristics of our enzyme: Thermal stability, Stability against pH, etc. Thisinformation will be useful for the first stages of purification process. It is possible to choose between these separations techniques: Heat treatment, Ammonium sulphate precipitation, Ion exchange chromatography, Gel filtration chromatography, chromatofocusing, etc.
Our main objective is to purify homogeneously (without any other polluted enzyme) our enzyme N° 3 which is contained in the initialmaterial. For that, since a given sample it will be making the indicated tests in the description of the programme sequentially, changing all the conditions for each experiment to optimize the purification of the protein that we have been looking for.

Key words: Enzyme, purification, PROTEIN

INTRODUCCIÓN

U
no de los principales procesos para el estudio de un complejo proteico es su purificaciónde una solución denominada extracto.
La purificación de una sustancia de interés, ya sea una proteína, carbohidrato, acido nucleído, etc. se hace siguiendo los criterios de separación basados en alguna propiedad física o química que diferencia al compuesto en cuestión de otros que en principio estarían ligados a él.
El aislamiento de una proteína, como lo es en nuestro caso, puedesimnp0lificarse con una cuidadosa selección de la fuente, facilidad de obtención del tejido escogido, posibilidades de estabilización, etc. Las fuentes comunes son los tejidos de los animales domésticos tales como el pollo, buey, cerdo, rata. Son fuentes alternativas los microorganismos de fácil cultivo como la E. Coli o la levadura Baker (Saccharomyces cerevisiae).
Entre los diversos criterios deseparación podemos mencionar algunos, como: la temperatura a la cual se desnaturalizan sustancias que no soportan tal variación que exceda el límite de termoestabilidad; se puede citar a aquellos que fraccionan las moléculas basándose en sus tamaños, como la cromatografía de filtración en gel y la ultracentrifugación.
Otros métodos como los que separan las moléculas atendiendo a las diferencias en...