Purificacion dna genomico

Purificación de DNA génomico con solución Chomczynski
Protocolo de extracción de D NA de leucocitos con solución Chomczynski

1. Propósito

Este protocolo permite la purificación de DNAgénomico a partir de células o tejidos de origen animal, vegetal, de bacterias y levaduras. El DNA se purifica en dos pasos: un paso es la lisis celular y homogenización; y otro de precipitación conalcohol etílico. La simplicidad y rapidez del método permite el procesamiento simultáneo de gran número de muestras, y la reproducibilidad y pureza del DNA obtenido facilita su uso posterior en cualquieraplicación en biología molecular (Ausubel F, et al., 1990).

2. Materiales

➢ Tubos eppendorf de 2 ml
➢ Solución Chomczynski
➢ Cloroformo
➢ Etanol absoluto
➢ Etanol al95%
➢ Agua desionizada estéril
➢ Centrifuga
➢ Puntas estériles
➢ Micropipetas

3. Procedimiento

a) Para efectuar la purificación del DNA a partir de leucocitos, se requieren6 ml de sangre (sacados en tubos Vacutainer con EDTA, anticoagulante que imposibilita la disponibilidad de calcio, que es imprescindible en la coagulación, ya que sin el calcio, la muestra de sangreal centrifugarla no se coagulará y se podrán separar las moléculas sin ningún problema). Centrifugar la muestra de sangre a 5000 g x 8 minutos a Tº ambiente.

b) Eliminar el plasma del tubo reciéncentrifugado.

c) Extraer 100 ul de leucocitos y depositarlos en un tubo eppendorf de 2 ml.

d) Agregar 1 ml de solución Chomczynski al tubo eppendorf que contiene los 100 ul de leucocitos.Solución que actúa a nivel de membrana nuclear con el objetivo de romperla y liberar los ácidos nucleicos ejerciendo una función de detergente.

e) Lisar la solución con pipeteo suave y repetido,observándose una cosistencia muy viscosa de la solución, producto de la homogenización de los componentes de la solución, la cual presenta un color mas claro.

f) Centrifugar la solución homogenizada a...