Purificación de la lizosima


INFORME DE LABORATORIO

Sebastian Correa Montoya
Jhon E Vera O
Maria Alejandra Jaramillo
Jefferson Stee Mercado
Sebastian Obando
ESTUDIANTES DE PROFESIONAL EN CRIMINALISTICA DEL TECNOLOGICO DE ANTIOQUIA



INTRODUCCION
“es una enzima de 14,4 kilodalton que daña las células bacterianas catalizando la hidrólisis de las uniones beta 1,4 entre los residuos de ácidoN-acetilmurámico y N-acetil-D-glucosamina en un peptidoglicano.” Es una enzima hidrolasa que actua sobre bacterias gram positivas(Micrococcus lysodeikticus) destruyendo su pared bacteriana en el huevo es extraida para uso comercial del control bacteriano en los vinos, sirve como enzima catalitica la lisozima hace que las células fagocíticas puedan absorber más fácilmente a la bacteria. Para su extraccion se lecambia el punto isoelectrico con el tampon A (glicina/NaOH 100mM, pH 10)solo una proteina tiene carga negative, la resina se adhiere luego se centrifuga y debido a este movimiento se precipita el material mas pesado y el menospesado queda en el sobrenadante y luego hay que seperar la resina de la lisozima

Ref: Blake CC, Koenig DF, Mair GA, North AC, Phillips DC, Sarma VR. Structure of henegg-white lysozyme. A three-dimensional Fourier synthesis at 2 Ångstrom resolution. Nature, 206, 757-61


MATERIALES Y METODOS
Todos los materiales fueron otorgados por la institucion univeristaria Teconologico de Antioquia la cual nos brindo:
-Huevo de Gallina para la obtención de la enzima
-Tampon A: glicina/NaHO 100mM,pH10
-Carboximetil-Celulosa
-Sulfato de Cuprico (CuSO4) Reactivo deBiuret
-Tubo Cónico
-Probetas
-“pHmeter simpHony SP70P”
-2 pipetas de 10ml
-2 beacker
-1 indular de Ref:004
Se tomo una muestra de 1ml de clara de huevo la cual fue vertida en una probeta y diluida con 4ml de tampon A, se dejo reposar por 4.42s consiguiente a esto se le virtio 5ml de tampon A. En dicha probeta de este se extrajo una muestra de 1ml y se virtio en un tubo conico con TamponA, en el mismo tubo se virtieron 5ml de resina activada con un ph de 13.0 el cual fue registrado por PHmeter simPHony “sp70p” este se sacudio durante 15min, al cumplirse este tiempo se uso un indular Ref.004 para centrifugar la muestra durante un lapso de 3 minutos con una velocidad de 600 rpm (revoluciones por minuto) consiguiente a esto hubo una presipitacion de la clara de huevo, se tomaron6ml con 14 gotas de NaOH (hidróxido sódico) y 7 gotas de CuSO4 en un tubo conico de Tampon A, lo siguiente a esto fue que observamos una coloracion violeta en el sobrenadante con lo que se da a demostrar la presencia en la clara de huevo, quedando en el precipitado la lizosima y la resina la cual no tuvimos tiempo de separar.



Proteinas de la clara de huevo: Aproximadamente, el huevocontiene unos 6,29 gramos de proteínas, 3,6 de los cuales, provienen de la clara del huevo. Además de las proteínas, encontramos otros nutrientes en la clara del huevo, como por ejemplo, riboflavina, niacina, ácido fólico, vitamina B12, calcio, hierro, cobre, zinc y sodio. De las 72 calorías que tiene el huevo, tan sólo 17 pertenecen a la clara.
Tampón: Los organismos vivos soportan muy mal lasvariaciones del pH, aunque tan solo se trate de unas décimas de unidad, y por ello han desarrollado en la historia de la evolución sistemas tampón o buffer que mantienen el pH constante, mediante mecanismos homeostáticos. Las variaciones de pH, afectan a la estabilidad de las proteínas y, en concreto, en la actividad catalítica de los enzimas, pues en función del pH, pueden generar cargas eléctricas quemodifiquen su actividad biológica.
Glicina: Es el aminoácido más pequeño que existe, ya que no posee rama lateral. Forma parte de la estructura de las proteínas, además de funcionar como neuro transmisores en combinación con la glutamina teniendo un papel importante en la función cerebral.
http://www.ecured.cu/index.php/Glicina
Carboximetil-celulosa: es un polímero aniónico soluble en...