Purificación de Lapachol

INTRODUCCIÓN
Las técnicas cromatográficas se emplean para separar los componentes individuales de una mezcla y, en ciertos casos, para identificar un compuesto comparando su comportamiento cromatográfico con el de sustancias conocidas empleadas como patrón. La base de la técnica es que cuando un determinado soluto interactúa con dos fases, una de ellas, habitualmente sólida, llamada faseestacionaria, experimenta una serie de procesos (adsorción en fase sólida, solubilización en cada fase, arrastre por la fase móvil, etc.) que, en último extremo, llevan a que el soluto se reparta entre ambas fases. En el equilibrio, la relación entre las concentraciones del soluto entre ambas fases es constante, y se denomina coeficiente de reparto. Si en una mezcla, cada componente tiene uncoeficiente de reparto diferente del de los otros, la separación será buena. Naturalmente, dicho coeficiente depende de la naturaleza de las fases, así como de las condiciones de la cromatografía.
La cromatografía en columna se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se utiliza, generalmente, gel de sílice o alúmina dentro de unacolumna. La elección del disolvente es crucial para una buena separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicación de presión (cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio, para evitar que la sílica o la alúmina queden retenidasen la columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general en tubos de ensayo. Una columna de cromatografía es un tubo de vidrio relleno con una sustancia sólida de propiedades adsorbentes constituida por pequeñas partículas: gel de sílice yalúmina son las más usadas. Este relleno es lo que se conoce en cromatografía como la fase estacionaria. A través de la columna se hará pasar una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes denominada eluyente y/o fase móvil. La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequeña cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente, en la parte superior de la columna, quedandoadsorbida por el mismo. A continuación se pasa un flujo de eluyente a través de la columna. Los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, haciéndoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografía. Algunos compuestos se ven más fuertemente retenidos por eladsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarán más despacio. Por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarán a mayor velocidad.
Para evidenciar la separación de los componentes se recurre a otra cromatografía, la cromatografía en capa fina o TLC.
OBJETIVOS
Obtener el lapachol con un alto grado de pureza mediante separación por cromatografía en columna.
Identificar mediante TLC lamuestra más pura comparando con un estándar de lapachol.
Conocer los fundamentos teóricos sobre los cuales se basan la separación por cromatografía en columna.

METODOLOGÍA
Para empacar la columna, sujetar en el soporte con las pinzas. Introducir hasta el fondo un pequeño pedazo de algodón, luego agregar aproximadamente 8mL de eluyente y finalmente presionar suavemente el algodón para quequede bien colocado y sin burbujas.
Preparar una suspensión de 5g de gel de sílice para columna en 40mL de eluyente y agitar por 5min para eliminar las burbujas de aire.
A través del embudo de vidrio verter la suspensión en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme.
Abrir la llave para eliminar el exceso de disolvente teniendo cuidado de no dejar secar la...