QIMICA

Prácticas de Microbiología
2º Curso (Lic. Biología)

Departamento de Microbiología y Genética
Universidad de Salamanca

Práctica 1
TÉCNICAS DE MICROBIOLOGÍA BÁSICA:
RESIEMBRA
DE
MICROORGANISMOS,
MICROSCOPIO ÓPTICO y TINCIONES.

AISLAMIENTO Y
MANEJO
DEL

Introducción
1. Obtención y mantenimiento de cultivos puros
El trabajo con microorganismos no se realiza con célulasaisladas, sino con poblaciones
extensas y homogéneas del microorganismo a estudiar. Por lo tanto, el microbiólogo utiliza
técnicas que permiten obtener un cultivo puro, y luego cultivar a gran escala dicho
microorganismo.
Para obtener cultivos puros se han de utilizar instrumentos estériles, es decir, libres
de otros microorganismos no deseados (contaminantes). La esterilidad se consigue pordiferentes métodos:
1.
2.

3.

4.

5.

Calor seco. Para material de vidrio y de metal. Estos objetos (envueltos en papel o
aluminio) se someten a una temperatura de 170°C durante al menos 90 minutos.
Calor húmedo. Se utiliza para soluciones acuosas y plásticos. Este material se somete a
una temperatura de 120°C durante 20 minutos en una atmósfera de vapor de agua a
elevada presión, lo cualevita la ebullición. Se realiza en el autoclave.
Filtración. Para esterilizar soluciones termolábiles, a las que se hace pasar a través de un
filtro con un tamaño de poro que permite el paso de la solución, pero no de los
microorganismos.
Esterilización química. Se utiliza para esterilizar material (generalmente algunos tipos
de plástico) termolábil. Se utilizan sustancias como el óxido deetileno, que se eliminan
una vez finalizado el proceso de esterilización.
Radiación. La radiación UV o las radiaciones α o γ pueden utilizarse para esterilizar
habitaciones o algunos plásticos.

Para poder estudiar los microorganismos en el laboratorio el microbiólogo también debe
utilizar medios de cultivo que posean los nutrientes necesarios para el crecimiento de los
mismos. Si losnutrientes están en forma de solución acuosa hablamos de medios de cultivo
líquidos, mientras que si añaden solidificantes, como la gelatina o el agar (2-3%), obtenemos
medios de cultivo sólidos. A veces se utilizan medios de cultivo semisólidos, si la
concentración de agar es 0,6-1,5%. Los medios de cultivo se esterilizan mediante calor
húmedo.
Para aislar un microorganismo de una mezcla de variosy obtener un cultivo puro del
mismo, la técnica más utilizada es la de siembra por estría en placa Petri, en medio sólido,
que permite obtener colonias separadas de individuos que proceden por división de una única

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célula. Estas colonias nos sirven para iniciar un cultivo a gran escala. Otra técnica consiste en
obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer dilucionesseriadas que se
vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas.
Una vez que se ha obtenido un cultivo puro, se puede mantener haciendo resiembras en tubos
de agar inclinado o bien congelando las células en glicerol (10-30%) a -80°C, en nitrógeno
líquido a -173°C, o mediante liofilización.

2. El microscopio
El microscopio es el instrumento más necesario para un microbiólogo, yaque permite la
observación de organismos que no pueden ser apreciados en detalle a simple vista, es decir de
los microorganismos. Existe una gran variedad de microscopios que, según la fuente de
iluminación utilizada, se agrupan en:
• Microscopios ópticos: La fuente de iluminación es la luz.
De campo claro. Permiten la observación de preparaciones, en su color natural o contrastadasmediante tinciones, resaltadas sobre un fondo más brillante.
De campo oscuro. Permiten la observación de formas celulares que destacan brillantes sobre
un fondo oscuro. Este efecto se consigue utilizando diafragmas especiales.
De contraste de fases. Gracias a la utilización de diafragmas y objetivos especiales, que
consiguen aumentar las diferencias en el índice de refracción de las células y el...