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ESTABILIDAD DEL REACTIVO

Stanbio Colesterol LiquiColor®
Para la determinación cuantitativa enzimática
colorimétrica de colesterol total en suero o plasma

El reactivo y el estándar son estables cuando se almacenan
a 2-8ºC hasta la fecha de caducidad. Una vez abierto el
reactivo debe evitarse su contaminación. Lleve el reactivo y
estándar a temperatura ambiente antes de usarlos. Con eltiempo el reactivo puede tomar un leve color rosado que no
afecta los resultados. Descartar el reactivo si la absorbancia
contra el blanco es superior a 0.3 D.O. a 500 nm.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS
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PRINCIPIO Y RESUMEN
El método enzimático para colesterol fue introducido en
1973 por Flegg1 y Richmond2 utilizando colesterol oxidasa de
origen bacteriano, seguida desaponificación química de los
ésteres del colesterol. Roeschlau3 modificó esta técnica y
Allain y col4 publicaron los primeros ensayos enzimáticos
completos, combinando colesterol oxidasa y colesterol
esterasa. Este método se basa en el de Allain y utiliza estas
enzimas en combinación con el reactivo peroxidasa/fenol-4antipirina, de Trinder5.
La colesterol esterasa (CE) hidroliza los ésteres paraoriginar
colesterol libre y ácidos grasos. El colesterol libre así producido más el colesterol preformado se oxidan en presencia de
colesterol oxidasa (Cox) para dar colest-4-en-3-ona y peróxido
de hidrógeno. Un cromógeno quinonaimina, con absorción
máxima de 500 nm, se produce cuando el fenol se acopla
oxidativamente con 4-aminofenazona, en presencia de
peroxidasa (POD) con peróxido dehidrógeno. La intensidad
del color rojo final es proporcional a la concentración total de
colesterol.
CE
Esteres de colesterol

Espectrofotómetro capaz de realizar lecturas de absorbancia a 500 nm con 1 cm de paso de luz.

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Baño de temperatura constante a 37ºC o portacubeta de
temperatura controlada.

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Pipetas serológicas o automáticas

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Cubetas o tubos de ensayo

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Agitador(tipo Vortex)

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Cronómetro.

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La sangre debe ser colectada seguida de 12 horas de ayuno.
La muestra puede ser suero o plasma colectado con EDTA
como anticoagulante. Evitar hemólisis.
ESTABILIDAD DE LA MUESTRA
El colesterol total y el colesterol HDL se reportan estables
durante 4 días a 2-8ºC, a -20ºC alcanzan una mayor estabilidad
hasta por 3meses para el colesterol total y 7-14 días para el
HDL. De ser posible la muestra debe separarse y analizarse
el mismo día de su extracción.

Colesterol + Acidos Grasos

SUSTANCIAS INTERFERENTES

COx
Colesterol + O2

Colest-4-en-3-ona + H2O2
POD

H2O2 + 4-aminofenazona + pHBs

2H2O + o-quinoemina
colorido

El reactivo de precipitación de Stanbio de lipoproteínas de
alta densidad(HDL) debe adquirirse por separado.

Los anticoagulantes como fluoruros y oxalatos dan valores
bajos falsos. La prueba no se interfiere con valores de
hemoglobina de hasta 200 mg/dL o por bilirrubina hasta
de 10 mg/dL. Sin embargo, muestras muy ictéricas y
hemolizadas se pueden corregir usando un blanco de suero
o plasma. (Véase Resultados)
PARÁMETROS DE PRUEBA
Longitud de onda

500 nmREACTIVOS

Tipo de reacción

Punto final

Colesterol Enzimático (Líquido): El reactivo contiene los
siguientes ingredientes activos a esta concentración.

Dirección de reacción

Creciente

Temperatura de reacción

37ºC

4-Aminofenazona

0.25 mmol/L

Relación de la muestra/reactivo

1:100

Fenol

25.0 mmol/L

Tiempo de equilibrio

3 seg

Peroxidasa

>5.0 U/mLTiempo de lectura

4 seg

Colesterol estearasa

>0.15 U/mL

Tiempo lag

300 seg

Colesteroloxidasa

>0.2 U/mL

Límite de absorbancia del Blanco

0.300 A

Reguladores y estabilizadores

Absorbancia máxima

2.000 A

Estándar de Colesterol (200 mg/dL): Solución acuosa de
colesterol con estabilizadores, surfactantes y conservadores.

Valor Normal bajo

120 mg/dL...