Quiimica

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE QUIMICA
CURVA DE CALIBRACION POR FOTOCOLORIMETRIA

LEIDY AREIZA RESTREPO
JHOSSEPH STHIT OCHOA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
SEDE MEDELLIN
2011
INTRODUCCION

Muchos compuestos pueden ser percibidos por nosotros al igual que muchos son lo que nosotros llamamos invisibles pero en realidad lo que sucede es químico, el color de cada sustancia dependede la luz ultravioleta absorbida, esta absorción de energía radiante nos permite identificar la concentración de cada sustancia por medio de fotocolorímetros,

Para nosotros los humanos y para quizás muchos seres vivos las sustancias invisibles son aquellas que trasmiten radiaciones electromagnéticas inferiores a los 400 nm, de 400nm a 800 nm las sustancias son previsibles por nuestra vista.Fenómenos que principalmente se fundamenta en la absorción de energía por parte de una molécula, donde esta excita sus electrones haciéndolos ocupar orbitales distintos a los que ocuparían en ausencia de luz.
Pero muchas especies tienden a tener un color más intenso que los otras y he ahí donde cabe decir que este fenómeno de intensidad energética se da dependiendo de la cantidad de moléculas enlas cuales los electrones se excitan.
La fotocolorimetria es el método que fisicoquímicamente permite identificar cada una de estas sustancias, el espectro de absorción y las concentraciones de estas, facilitando muchas acciones en los laboratorios que de una u otra manera manejan productos químicos.

Con el siguiente trabajo se pretende elaborar curvas de calibración y establecer laprecisión e intensidad del método de la colorimetría.
También se pretende resolver problemas específicos respecto a concentraciones y absorbancia de cada una de la sustancias.



MATERIALES Y REACTIVOS

* Fotocolorímetro
* Reactivo de Biuret
* Solución de albumina 3mg/ml
* Solución salina 0.9%

PROCEDIMIENTO
DETERMINACION DEL ESPECTRO DE ABSORCION DE LA ALBUMINA
* En untubo de ensayo agregamos 4 ml de la solución de albumina y 1ml de reactivo de biuret. Agitamos y esperamos media hora para que se desarrolle el color.
* Tomamos dos celdas del fotocolorímetro y agregamos en una agua destilada y en otra solución coloreada de la albumina. Llenándola hasta las ¾ partes de su volumen.
* Seleccionamos en el fotocolorímetro la opción de la absorbancia yajusto a la longitud de onda de 420 nm.
* Llevamos la solución blanca en la celda al fotocolorímetro y ajustamos la absorbancia en cero.
* Luego se llevó la celda de la solución coloreada y se tomaron apuntes de la absorbancia indicada. Aumentamos la longitud de onda de 20 en 20 tomando los datos de la absorbancia hasta llegar a una longitud de onda de 700 nm.

(λ) nm | Absorbancia | (λ)nm. | Absorbancia |
440 | 0.196 | 580 | 0.711 |
460 | 0.263 | 600 | 0.629 |
480 | 0.388 | 620 | 0.533 |
500 | 0.546 | 640 | 0.430 |
520 | 0.676 | 660 | 0.334 |
540 | 0.745 | 680 | 0.260 |
560 | 0.751 | 700 | 0.207 |

Los péptidos y proteínas producen un complejo coloreado muy usado para sus análisis cuando tienen un contacto con el reactivo de biuret , donde las la proteína porsus uniones peptídicas reacciona con los iones cúpricos del reactivo de en medio alcalino formando un complejo de color violeta, la generación del complejo nos permite analizar en el fotocolorímetro el espectro de absorción de la albumina que en teoría seria de 540 nm y experimentalmente nos dio como resultado 560 donde quizás pudimos haber empleado mal la muestra blanco del problema ya que debía deser agua destilada, y para este caso no sabíamos la pureza de esta misma lo cual pudo haber generado un margen de error en la prueba.

PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION DE LA ALBUMINA
* Marcamos 10 tubos de ensayo y en cada uno de ellos adicionamos según lo indicado en la tabla
* Agregamos a cada tubo 40 ml del reactivo de biuret , mezclamos y dejamos en reposo durante 15...