quimica 1

PRÁCTICA # 3
COLORACIÓN DE WRIGHT Y GIEMSA

A. Introducción
Con el fin de estudiar satisfactoriamente los frotis sanguíneos, es necesario colorearlos.
En la mayoría de los laboratorios los colorantes más empleados para la tinción
hematológica se basan en el de Romanowsky constituido fundamentalmente con la mezcla
de eosina (ácido) y azul de metileno (básico). Además se han incorporado elempleo de
derivados por oxidación del azul de metileno que se conoce con el nombre de azures (A, B,
C).
Son los azures los responsables de la coloración púrpura o roja de ciertas estructuras.
Tanto la eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH de las
diferentes estructuras celulares, de forma que las que tienen carácter básico fijan la eosina
mientras que lasque poseen propiedades ácidas fijan principalmente el azul de metileno.
Esto explica que las estructuras basófilas se tiñan de color azul mientras que los competente
acidófilas adquieren un color rosado. La diferente afinidad de ciertas granulaciones
citoplasmáticas por dichos colorantes permite clasificar a los leucocitos polimorfonucleares
en 3 grupos:
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Granulocitos eosinófilos,en los que la granulación específica contiene sustancias de
carácter básicos que fijan los colorantes ácidos y se tiñen de color rojo-naranja.
Granulocitos basófilos , en los que la granulación específica posee sustancias de
carácter ácido que fijan los colorantes básicos y se tiñen de color azul oscuro.
Granulocitos neutrófilos, en los que la granulación específica posee compuestos decarácter neutro por lo que fijan ambos colorantes simultáneamente, de ahí que se
tiñen de color pardo.

Dentro del grupo de colorante tipo Romanowsky los más utilizados son el de Wright,
Giemsa y May- Grünwald-Giemsa, entre otras.

1. Tinción de Wright
Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es
una solución de alcohol metílico de un colorante ácido(eosina) y otro básico (azul de
metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El
amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y
favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares.

Materiales:
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Colorante de Wright: para 100 mL se requiere de colorante de Wright (0.3g),
metanol (97.0 mL) yglicerol (3.0 mL). Disolver en un mortero el colorante con el
glicerol. Una vez disuelto se adiciona el metanol trasvasándolo a un frasco oscuro.
Agitar. Filtrar antes de usar.
Solución amortiguadora tamponada: en un litro de agua destilada se agregan 3.76 g
de hidrofosfato disódico (Na2HPO4* 2H20) y 2.10g de fosfato de potasio
dihidrogenado (KH2PO4). Mezclar todos los reactivos y guardar enfrasco de vidrio
en lugar fresco. Ajustar el pH a 7.2.
Rejilla horizontal o soporte de tinción.

Figura 4. Tinción de Wright manual en portaobjetos y cubreobjetos.
Fuente: Rodak B. Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. 2 ed. Rondinone S, trad. Buenos Aires: Médica
Panamericana, 2004. 884p.

Técnica:
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Colocar el frotis secado al aire sobre unarejilla o cubeta de tinción con la sangre
hacia arriba (ver figura 4).
Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright
gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos,
para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el
portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una
cantidadadicional si éste se comienza a evaporar.
Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright,
para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse
de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.
Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un
aspecto rosado al examinarlo a simple vista....