Quimica Biologica TP N 3 - Electroforesis en gel de poliacrilamida

Trabajo Práctico Nº 3:
Electroforesis en geles de poliacrilamida

Objetivo:
Estimar el peso molecular de polipeptidos y proteínas y evaluar la presencia de puentes disulfuro en los mismos.Materiales y métodos:
Ver “Guía de Trabajos Prácticos de Química Biológica 2013”, págs. 44 - 46

Resultados:
Gel 1









Patrones de PM
Marcador de PM
PM (Da)
Log PM
Distancia de migracion (cm)
RfMiosina
200000
5,30
0,5
0,13
β-galactosidasa
116000
5,06
1,0
0,26
Fosforilasa B
97000
4,99
1,2
0,32
Seroalbumina bovina
60000
4,78
1,8
0,47
Ovoalbumina
45000
4,65
2,5
0,66
Anhidrasa Carbónica
290004,46
3,5
0,92
 
Frente de corrida
3,8
1,00



* Para las muestras sin β-ME se estima un PM aparente, ya que las condiciones en las que se encuentran las proteínas difieren a las de los patrones de PM

y =-0,9348 X + 5,0169
Rf= -0,9348 x log PM + 5,0169
PM= 10^((Rf – 5,0169) / (-0,9348))

Gel 2




















m= cc/10 x 15μl




Análisis de resultados
Se comprobó que en presencia de β-ME lasmuestras de ovoalbúmina corren una menor distancia debido a que, al encontrarse desplegadas, su pasaje a través de los poros del gel se ve impedido. Puesto que se requirió la utilización de un agentereductor para desplegar a la ovoalbúmina se deduce que posee puentes disulfuro intracatenarios.
Las muestras de γ-globulina sin β-ME se vieron afectadas por el β-ME de otras calles por lo que sepresentaron dos bandas de distinto PM cuando debería haberse visto una banda de mayor PM. En la imagen del gel 1 puede verse que la γ-globulina de la calle 6 no se separó y que posee un PM mucho mayor al delas bandas que se separaron. Por lo tanto se deduce que la proteína posee puentes disulfuro intercatenarios, aunque con los datos obtenidos no se puede afirmar de cuantas cadenas se compone ni cuál essu PM total.
La concentración de acrilamida/bisacrilamida utilizada en el gel 1 fue apropiada puesto que permitió la correcta separación de las bandas de las proteínas. Sin embargo la cercanía entre...