quimica clinica

DETERMINACIONES EN QUÍMICA CLÍNICA
Ejemplos de Técnicas de Punto final reacciones Simples
1. Calcio: Arsenazo: Es una reacción simple de un solo pasoUn compuesto que es el Arsenazo III que es de un azul profundo, derivado del acido arsénico, reacciona con el calcio presente en el suero en un medio ligeramente alcalino y forman un complejo [Calcio-Arsenaso III]. Haciendo virar el color delArsenaso III a un color púrpura. Se puede visualizar a una longitud de onda de 620nm.
ARSENAZO III + CALCIO  [ARSENAZO III-CALCIO]
Siempre es preferible usar el tipo de método que sea por una sola reacción, es decir no utilizar reacciones acopladas ya que se aumenta la posibilidad de error
2. Nitrato Alcalino: Creatinina: El ácido pícrico en conjunto con el hidróxido de sodio se mezclanen partes iguales y forman un compuesto denominado Picrato Alcalino. Este Reacciona con la Creatitina y forma un complejo denominado como “Janowsky” que cambia de un amarillo claro a un anaranjado.
PICRATO ALCALINO + CREATININA  COMPLEJO JANOWSKY
Se hace en tiempo (cinética); se mide la producción en el tiempo de ese compuesto. Es un método bastante económico y está estandarizadoEjemplos de Técnicas de Punto final utilizando enzimas
El sistema debe contener todos los elementos necesarios en EXCESO para que la reacción se desarrolle esencialmente en un solo sentido, y la cantidad de enzima debe ser suficiente para que la reacción ocurra en corto tiempo.
Todo esto viene estandarizado de fábrica, si tuviese que estandarizarse a mano habría que ver el efecto de la temperaturasobre la concentración, el efecto del pH, el efecto del tiempo, el efecto de la concentración de enzimas, el efecto de la cocnentración de sustrato, el efecto de inhibidores competitivos y no competitivos, para establecer cuáles son las condiciones ideales.
1. Ácido Úrico: Uricasa: El ácido úrico por la uricasa es transformado en alantoína y peróxido de hidrógeno, y la reacción acoplada donde elperóxido de hidrógeno en presencia de DCBS mas 4-AAP se transforman por la peroxidasa en agua y en un compuesto coloreado denominado quinoneimina, de color rojo. En este sistema debe estar en exceso la uricasa, el DCBS y la 4 – AAP, el acido úrico será aportado por el suero que se vaya a valorar.



2. Colesterol: CHOD-PAP: son 3 reacciones, su nombre significa “colesterol oxidasa masperoxidasa” Los ésteres del colesterol por la colesterol esterasa es transformado en colesterol mas ácido graso. El colesterol con el oxigeno por la colesterol oxidasa es transformado en colest-4-en-3-ona mas peróxido de hidrogeno (H2O2). (H2O2) más el DCBS y la 4-AAP será transformado en un compuesto coloreado por la peroxidasa y se formará quinoneimina y agua. En este caso se requiere una reacciónprevia para obtener la reacción desde donde realizaré la medición, ya que quiero medir colesterol, pero este está en muy baja concentración libre en el organismo, por lo tanto la primera reacción es para dejar libre el colesterol y poder hacer la determinación.




3. Glucosa: GOD-PAP: Su nombre significa “glucosa oxidasa peroxidasa”. Existen dos métodos para hacer la medición, siendo esteuno y el otro es el de la hexoquinasa . En este caso la D- glucosa por la glucosa oxidasa es transformada en Acido D- gluconico mas (H2O2). El peróxido de hidrógeno, mas DCBS y 4-AAP por la peroxidasa es transformada en agua y un compuesto coloreado. (quinoneimina)






4. Glucosa: Hexoquinasa: Es este mejor que el anterior, es más sensible y específico, pero más caro. La glucosa enpresencia del ATP por la hexoquinasa es transformada en glucosa 6-P más ADP (vía de la GLICOLISIS). Luego la Glucosa 6-P es transformada por la glucosa 6-P deshidrogenasa en 6-fosfogluconato más NADH (Primera reacción de la vía de la glicolisis). Por tanto lo que se hace es tomar la vía metabolida de la glicolisis para poder determinar. Lo que se mide en este caso es el NADH el cual absorbe a la...