quimica organica

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
PROGRAMA DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR



PRACTICA DE LABORATORIO N° 2
OBTENCIÓN DE BIOMASAOBJETIVO


Esta guía tiene por objeto describir las pautas y recomendaciones generales para la obtención de biomasa y preparación para una posterior extracción del ADN genómico yplasmidial.
 
REACTIVOS

Cepa de E. Coli
Caldo LB


MATERIALES Y EQUIPOS

Centrífuga
Micropipeta de 100-1000ml
Nevera
Pipetas de 1 y 2 ml
Pera automatica
Viales
tuboseppendorf
Caja de petri
Guantes
Tapabocas


 PROCEDIMIENTO

1. Prepare caldo LB con antibióticos (Ampicilina):

a) Extracto de levadura 5g/L
b) NaCl 10g/L
c) Triptona 10g/Ld) Ampicilina 50 ug/ml

2. Tome con el asa una pequeña cantidad de colonias de E. Coli contenidas en la caja de petri y resuspenda en el tubo de ensayo con caldo LB en presencia deun mechero de alcohol.

3. Incube el cultivo por 18-20 horas a 37º C

4. Añada 1-1,5 ml del cultivo de E.coli en un tubo Eppendorf.

5. Centrifugue  la muestra por 3 min a12000 r.p.m.

6. Descarte el sobrenadante y llene nuevamente el tubo con 1-1,5 ml del cultivo.

7. Centrifugue  la muestra por 3 min a 12000 r.p.m. Este procedimiento se realizancon el fin de obtener la mayor cantidad de biomasa.

8. Guarde a –20ºC hasta la próxima utilización.


PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

¿Para qué se hace la obtención de biomasa dela bacteria E. Coli antes de la extracción de ADN bacteriano?

¿Por qué se utiliza el caldo LB para hacer la inoculación del cultivo bacteriano de E. Coli y no otro medio de cultivo?BIBLIOGRAFIA

http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/transformaciondeecoli/texto-transfecoli/transformacion-metodo-y-resultados