Quimica sanguinea

Química sanguínea
Proteínas totales del suero: albúmina y globulina
-Introducción:
-Las proteínas totales del suero son enzimas, proteínas de transporte, anticuerpos y factores de coagulación; se clasifican en albúminas y globulinas de acuerdo con sus propiedades de solubilidad.
El contenido de proteínas totales en suero depende del estado nutricional.
Los valores de referencia son:
6-8g/100ml
-Albúmina: Es la proteína de mayor concentración en sangre, conserva la presión osmótica coloide y transporta ciertos metabolitos insolubles.
La baja concentración ayuda a identificar desnutrición y a clasificarla en grados.
Valor de referencia:
3.5 – 5g/100ml
-Globulina.- Se clasifica en tres tipos:  α,  β y  γ
 α y β. - transporta iones metálicos, lípidos unidos a proteínas yvitaminas liposolubles.
γ.- Son anticuerpos de defensa inmunitaria.
Valor de referencia.- 2 - 4.5g/100ml

Objetivo:
Determinar la cantidad de proteínas totales, la concentración de albúmina y la relación albúmina globulina, con la finalidad de corroborar el diagnóstico presuntivo, desnutrición.

Técnica:
El procedimiento clínico más generalizado para la medición de la concentración deproteínas totales en el suero es la técnica de Biuret. Este método se basa en la relación del ión cúprico con los enlaces peptídicos de la proteína en solución básica, lo que da un complejo de color azul.
Las técnicas para la medición de la fracción de albúmina dentro de la concentración de proteínas totales son las que se basan en la fijación de colorante, la electroforesis y lainmunoprecipitación. Las primeras se basan en el cambio proporcional del color cuando la albúmina se mezcla con soluciones amortiguadoras de ciertos colorantes indicadores de pH, siendo el verde de bromocresol uno de los más empleados.
Albúmina + verde de bromocresol pH 4.2 Complejo albúmina- verde de bromocresol
(no absorbe a 600 nm)(absorbe a 600 nm)
Cabe mencionar que, dado que la albímina es una molécula proteica hidrosoluble con carga negativa, tiene capacidad de fijar colorantes aniónicos.
Puesto que las proteínas séricas totales representan la suma total de las distintas proteínas obtenidas por electroforesis fraccionada, no es un índice sensible de elevaciones o descensos anormales de lasfracciones individuales. Con la desnutrición grave o deprivación proteica prolongada, la concentración proteica sérica total puede estar disminuida. También tienden a disminuir con las hemorragias, proteinuria masiva y gastroenteropatía con pérdida de proteínas.
Debido a que la albúmina constituye el componente más importante de las proteínas séricas totales, las alteraciones en su concentración sonparalelas a las alteraciones clínico-patológicas mencionadas para las proteínas totales del suero.
Técnica de Henry-Sobel-Berman
(Biuret modificado)
Recursos:
Por muestra
Biológicos:
5mL de sangre
Reactivos:
Reactivo de Biuret
Patrón de proteínas g/100mL
NaOH al 3%
Material:
1 Gradilla
3 Tubos de ensayo de 16 x 150 mL2 Tubos de ensayo de 13 x 100 mL
2 Pipetas graduadas de 10 mL
2 Pipetas graduadas de 1 mL
1 Ligadura
1 Jeringa de 5 mL
Aparatos:
1 Spectronic 20
1 Centrifuga clínica
TUBOS | BLANCO | PATRÓN | PROBLEMA |
PATRÓN DE PROTEÍNAS | - | 0.1 mL | - |
SUERO PROBLEMA | - | - | 0.1 mL |
NaOH AL 3% | 5.0 mL | 5.0 mL | 5.0 mL |
REACTIVO DE BIURET | 1.0 mL | 1.0 mL | 1.0 mL |

Dejar reposar atemperatura ambiente durante 15 minutos. Después de agitar todos los tubos y leer a 545 nm en el Spectronic 20, ajustado el aparato con el blanco de reactivos. Leer en absorbancia.
Obtención de la muestra:
1) Obtener 5 mL de sangre venosa
2) Depositar la sangre en el tubo de ensayo de 13 x 100 y dejar que se coagule
3) Obtener el suero, centrifugado a 2500 rpm durante 5 minutos...