Quimica

3.- Metodología a emplear en la determinación de atorvastatina en plasma humano

El tratamiento de muestra es una etapa fundamental en todo método de análisis, en especial para los casos donde la matriz que rodea al analito es muy compleja (matrices biológicas). Por consiguiente el número de pasos necesarios en la preparación de la muestra para su posterior cuantificación, debe ser el mínimoposible a fin de prevenir la pérdida o descompocisión del analito de interés, además de evitar que se dañen las columnas de HPLC e instrumentos de análisis.

Para nuestro estudio usaremos los siguientes métodos de extracción (líquido-líquido y fase sólida). A continuación se describen cada uno de ellos.

● Extracción líquido-líquido (LLE por sus siglas en inglés Liquid- Liquid Extraction)Es un método común para cambiar las matrices que rodean a los analitos, además de extraer compuestos orgánicos de soluciones acuosas. Los analitos se concentran en la capa extraída y todas las sales inorgánicas presentes quedan en la capa acuosa. Por lo tanto la extracción líquido–líquido permite extraer el compuesto de interés en un volumen mucho más pequeño y por ende lo concentras además deaislarlo.

La extracción líquido – líquido consiste en la distribución (partición) de un analito entre dos líquidos inmiscibles y está representado por el siguiente equilibrio: [A]0
[A]ac, donde [A]0 y [A]ac son, la concentración del analito en la fase orgánica y en la fase acuosa respectivamente.

El coeficiente de distribución entre estas dos fase (Kd) está dada por la ecuación: Kd = [A]0 /[A]ac.
Entre las ventajas que tiene la extracción líquido–líquido para el tratamiento de las muestras a ser analizadas por cromatografía, podemos mencionar: Primero, el analista puede separar el compuesto de interés de grandes concentraciones de material endógeno, que puede interferir en la determinación final. Segundo, es una técnica simple, rápida y relativamente costosa. Tercero, el extractoque contiene el analito puede ser evaporado a sequedad y el residuo puede ser redisuelto en una cantidad de solvente apropiado. Y cuarto, se pueden hacer extracciones múltiples pudiendo alcanzar buena recuperación. En la figura 5 podemos observar un esquema del procedimiento tradicional de extracción, de compuestos orgánicos en muestras de sangre. [23]

[pic]

Figura 5. Diagrama esquemáticodel procedimiento tradicional de extracción de compuestos orgánico en muestras de sangre.

● Modalidades de la extracción líquido- líquido

Extracción por ajuste de pH

Los ácidos y las bases débiles pueden ser purificados, controlando el pH. Esto consiste en ajustar el pH, para generar una especie ionizada que permanecerá en la fase acuosa, mientras que los demás compuestos son extraídos enla fase orgánica. Una vez removida la fase no polar se ajusta el pH de la fase acuosa para retornar al analito a su forma neutra la cual puede ser extraída con una nueva fracción de solvente orgánicos.

Existen algunos casos descritos en la literatura, en donde el procedimiento es lo opuesto a lo descrito anteriormente, ya que se ajusta el pH para extraer al compuestos de interés en la faseorgánica y la fase acuosa es descartada. [23]

Extracción con solvente por efecto “salting out”

La adición de sales inorgánicas solubles en agua como por ejemplo el NaCl, crea un alto grado de interacción entre las moléculas de agua y los iones inorgánicos en solucion, disminuyendo así la cantidad de agua libre para interaccionar con el compuesto en estudio y con ello la polaridad de loscompuestos por la fase acuosa. En consecuencia estos pueden ser extraídos en la fase orgánica. Esta técnica es útil para separar compuestos polares de matrices de alta polaridad.

Por otra parte la adición de sales inorgánicas a muestras biológicas, disminuye la formación de emulsiones y facilita la extracción de los compuestos en solventes orgánicos. [23]

Extracción por formación de complejos...