Quimica

Cromatosrafia en columna

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
OBJETIVOS

a) Conocer la técnica de cromatografía
factores que en ella intervienen.

en columna, sus características y los

b)

Utilizar la cromatografía en columna para la separación de mezclas de compuestos orgánicos. Controlar por cromatografía en capa fina la separación de una mezcla de compuestos por cromatografía en columna.c)

ANTECEDENTES

a) b)

Cromatografía en columna. Caractelísticas

y

aplicaciones.

Cromatografía de adsorción y de partición o reparto.

c)

Faciores que influyen en una separación por cromatografía en columna. (En una cromatografía de adsorción).
por cromatografía en columna.

d) Selección de eluyentes y adsorbentes para la separación de compuestos
e) Técnicas de separacióncromatográfica por elución, por adsorción
desDlazamiento.

y

por

INFORMACION

a) La cromatografía en capa f¡na es una técnica para determinar el número de componentes de una mezcla y como una prueba preliminar para realizar una
cromatografía en columna, entre otros.

b) El proceso de cromatografía en columna se controla por cromatografía en capa fina, de tal manera que se puedeseparar cada componente de la mezcla.

c) La cromatografía en columna se usa para separar grandes cantidades de material: >100 mg. El proceso de cromatografía consta de una fase móvil (eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las
sustancias que se deseen separaf.

58

Quím. Orgánica

I (l3l l)

Cromatosrafia en col umna

DESARROLLO EXPERIMENTAL MATERIAL POREQUIPO DE 2 ALUMNOS

Columna para cromatografía Matraz redondo fondo plano 125 ml

1

I
1

T de

destilación

Pioeta de 5 ml * Probeta de 25 ml * Piseta de 125 ml c/eluvente
Espátula Frasco p/cromatografia c/tapa Portaobjetos Tubos capilares Frascos "viales" Embudo de vidrio Pinza de tres dedos con nuez Recipiente eléctrico para B.M.

2 2
1 1

Refrigerante p/agua c/manguerasColector Taoón esmerilado Vaso de pp. de 100 ml Vaso de pp. de 150 ml * Vidrio de reloi Aqitador de vidrio
* Graduados

I
1 1

2 2
1
1

4

I
1 1

SUSTANCIAS Y REACTIVOS Acido benzoico Azul de metileno Silicaqel para columna Silicaqel para crom. en capa fina Acetato de etilo Hexano Sulfato de sodio anhidro Yodo

PROCEDIMIENTO

Se realizará un solo experimento, el que el profesorindique.
EXPERIMENTO 1. PURIFICACIÓN DE ÁCIDO BENZOICO

Se le proporcionará una mezcla sólida de ácido benzoico contaminado con azul de
metileno, los cuales se separan por cromatografía en columna.

Para empacar la columna sujétela en el soporte con las pinzas. Si la llave es de vidrio, engrásela ligeramente y mantenga la posición de cerrado. Introduzca hasta el fondo un pequeño pedazo dealgodón ayudándose con la varilla de vidrio, agregue 8 mL de eluyente (acetato de etilo) y presione suavemente el algodón para que quede bien colocado y sin burbujas (Nota 1).

59 Q. Orgrínica I (131

l)

Cromatograff a en columna

Prepare una suspensión de.l0 g de qel de sílice para columna en 40 mL de eluyente y agite por 5 min. para el¡minar las burbujas de aire. A través del embudo devidrio vierta la suspensión en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme. Abra la llave para eliminar el exceso de disolvente teniendo cuidado de no dejar la gel de sílice sin disolvente (Nota 2).

En un vaso de precipitado de 100 mL disuelva 0.4 q de la mezcla problema con la mínima cantidad de eluyente (4 o 5 mL), ayudándose con el agitador, viértala concuidado para que quede distribuida uniformemente encima de la superficie de la gel de sílice. Abra la llave para colectar el disolvente y que se adsorba la muestra aplicada
(cuidando que no se seque la columna).

Colecte fracciones (eluatos) de 6 mL en los frascos viales y verifique la separación haciendo cromatoplacas (Notas 3 y 4) de cada una de las fracciones usando una muestra testigo como se...