quimica

BROU VERD BRILLANT BILIS

Aquest mitjà està recomanat per al recompte de coliformes totals i fecals, per la tècnica del nombre més probable. 

Fonament
En el mitjà de cultiu, la peptona aporta els nutrients necessaris per a l'adequat desenvolupament bacterià, la bilis i el verd brillant són els agents selectius que inhibeixen el desenvolupament de bacteris Gram positives i Gram negatives aexcepció de coliformes, i la lactosa és l'hidrat de carboni fermentable. 
És una propietat del grup coliforme, la fermentació de la lactosa amb producció d'àcid i gas.
FÓRMULA (g/L)
INSTRUCCIONS
  Bilis de buey deshidratada
20.0
Suspendre 40 g de la pols deshidratada per litre d'aigua destil·lada. Dissoldre i distribuir 10 ml per tub amb campaneta de Durham. Preparar a més,el mitjà a doble concentració. Esterilitzar en autoclau a 121°C durant 15 minuts.
  Lactosa
10.0

  Peptona
10.0

  Verd brillant
0.0133

pH final: 7.2 ± 0.2

SEMBRA
a.- Per a l'anàlisi de coliformes totals en mostres fluïdes, sembrar per triplicat: 10 ml en brou doble concentració i 1ml i 0,1 ml en brou simple concentració.
Nombre de tubs
Volum de la mostra
Volum del mediConcentració 
del medi
3
10 ml
10 ml
Doble
3
1 ml
10 ml
Simple
3
0.1 ml
10 ml
Simple



b.- Per a l'anàlisi de coliformes totals en mostres sòlides (aliments, cosmètics, fàrmacs), efectuar dilucions seriades 10-1, 10-2 i 10-3 i sembrar cada dilució per triplicat enmig de cultiu simple concentració.
Nombre 
de tubs
Dilució de la mostra
Volum de la mostra
Volum del mediConcentració 
del medi
3
10-1
1 ml
10 ml
Simple
3
10-2
1 ml
10 ml
Simple
3
10-3
1 ml
10 ml
Simple




c.- Per a anàlisi de coliformes fecals, a partir de cada tub positiu en el test present de coliformes totals (provinent de Verd Brillant i Bilis 2% Brou o Mac Conkey Brou o Lauril Sulfat, utilitzant la tècnica del NMP), o a partir de colònies presents en diferents mitjans, que espresumeix siguin coliformes, transferir una ansada a un tub amb Verd Brillant i Bilis al 2% brou fresc, incubant a 45 +/- 0.5 ºC i una altra en Aigua Triptona amb incubació a 35-37 ºC, per detectar la producció de indol.
INCUBACIÓ
a- Para de coliformes totals: a 35-37 °C durant 24 hores.
b- Per coliformes (fecals): a 44.5-45.5 °C durant 24 hores.
RESULTATS
-Positiu: presència de gas.
Amb elnombre de tubs positius, calcular el nombre mes probable. El resultat s'expressa per grams o 100 ml de producte
-Negatiu: absència de gas.
Microorganismes
Creixement
Gas
Indol#
Escherichia coli ATCC 25922
+
+*
+*
Enterobacter spp.
+
+
-*
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
+
+*
-*
Salmonella typhimurium ATCC 14028
+
-
-
Bacterias no fermentadores de lactosa
+
-
VariableStaphylococcus aureus ATCC 25923
-
-
-
+* o -* 10-25% de ceps negatius o positives
# a partir d'Aigua *Triptona
CARACTERÍSTIQUES DEL MEDI
Medi preparat: verd esmeralda, transparent
EMMAGATZEMATGE
Mitjà deshidratat: a 10-35 ºC.
Mig preparat: a 2-8 ºC.
Presentació
x 100g :Código:  B02-107-05
x 500g :Código:  B02-107-06














AGAR McCONKEY
Aquest mitjà s'utilitzaper a l'aïllament de bacils Gram negatius de fàcil desenvolupament, aerobis i anaerobis facultatius. Permet diferenciar bacteris que utilitzen o no, lactosa en mostres clíniques, d'aigua i aliments. Totes les espècies de la família Enterobacteriaceae desenvolupen en el mateix.
FUNDAMENT
En el mitjà de cultiu, les peptonas, aporten els nutrients necessaris per al desenvolupament bacterià, lalactosa és l'hidrat de carboni fermentable, i la mescla de sals biliars i el cristall violeta són els agents selectius que inhibeixen el desenvolupament de gran part de la flora Gram positiva. 
Per fermentació de la lactosa, disminueix el pH al voltant de la colònia. Això produeix un viratge del color de l'indicador de pH (vermell neutre), l'absorció en les colònies, i la precipitació de les sals...