quimica

UNIVERSIDAD
TECNOLOGICA
NACIONAL
FACULTAD REGIONAL ROSARIO
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA

CATEDRA DE BIOTECNOLOGIA

Trabajo práctico n° 3
“Siembra y recuento de microorganismos.”

2009

Jefe de Cátedra: Ing. Eduardo Santambrosio
Jefe de Trabajos Prácticos: Ing. Marta Ortega
Auxiliar de 1°: Ing. Pablo A. Garibaldi

1. OBJETIVOS
Identificar el uso de medios de cultivo deacuerdo al microorganismo a estudiar. Interiorizar
al alumno en el reconocimiento de los materiales empleados en la siembra de
microorganismos.
2. FUNDAMENTO TEÓRICO
Siembra
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un
medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Una vez sembrado, el medio decultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
Que se efectúen asépticamente
Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
Que se realicen solo los manipuleos indispensables
Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar.
Existendiferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos
del microorganismo a estudiar.
Medios sólidos:
Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y
sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este
método se utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión.
Unavez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio
necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este
método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y
microaerofílicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con
ayuda de unaespátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción
total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para
microorganismos aerobios estrictos.
Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido y se deja solidificar.

Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener
colonias aisladas
•

Técnica AConsiste en cargar el ansa con la muestra y
hacer estrías paralelas en la cuarta parte de
la superficie de la placa, se quema el ansa,
se enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a
estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada
inicialmente y cubriendo otro cuarto de la
placa. Por último, sin quemar el ansa, se
estría el resto de la superficie sin sembrar.
•

Técnica B

Con el ansa cargada sehacen 3 o 4 estrías; se
quema el ansa, se hacen 3 o 4 estrías
perpendiculares a las anteriores, se quema el
ansa y se repite el procedimiento hasta agotar
la superficie de la placa.

Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de
medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.

El inóculo se siembra, con ayuda de ansa, de lasiguiente manera:
•

En profundidad con
ansa de punta: se pica
con el ansa el cultivo
a sembrar y se
introduce
mediante
punsión en el medio
contenido en la parte
inferior del tubo.

•

En superficie con ansa
de aro: se pica con el
ansa el cultivo a
sembrar y se esparce el
mismo
sobre
la
superficie en bisel en
forma de zigzag.

3. TRABAJO EN EL LABORATORIO
3.1. Materiales
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Pipetas de 1 ml y 10 ml
Erlenmeyer de 250 ml
Espátula
Agar plate count
Agar VRBL
Agar Baird-Parker
Caldo Mc Conkey
Espátulas de Drigalsky
Cajas de Petri
Estufa de cultivo
Baño termostático
Recipientes para baño maría
Ansa de platino
Agua destilada
Muestra a analizar
Tubos de ensayo de 10 y 20 ml
Campanas de Durham
Algodón y...