Quimica

CUANTIFICACIÓN DE PROTEINAS POR METODOS ESPECTROFOTOMETRICOS

RESUMEN

El objetivo principal de esta practica fue cuantificar la concentración de proteínas en una muestra mediante el método de Biuret y asi mismo analizar la formación de compuestos complejos en muestras biológicas, para esto la practica se dividió en 2 etapas en la primera se utilizo un método espectrofotométrico(espectrofotometría UV-Visible) y una serie de diluciones realizadas con el patrón de albumina sérica bovina y el reactivo de Biuret, en este caso no se determino concentración de una muestra problema. En la segunda etapa se extrajo la albumina y la caseína de la leche, y la globulina y albumina del huevo, luego se realizaron las pruebas para identificar y cuantificar estas proteínas con el reactivo deBiuret, se obtuvo como resultado que en la leche hay mas contenido de caseína que de albumina y que en la clara de huevo el contenido de globulinas es mayor al de albumina; en estas etapas se concluyo que la concentración de proteínas es directamente proporcional a la intensidad en la coloración(violeta).

Palabras Clave: Proteínas, espectrofotometría, reactivo de Biuret, complejos coloreados.INTRODUCCIÓN

Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, la formación de derivados químicos, o la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.

|Método Cuantificación de |Características |
|proteínas ||
|Método de Kjeldahl |El método se basa en la Digestión|
| |ácida total de la proteína y |
| |conversión cuantitativa de |
| |nitrógeno a NH3, que se valora |
| |por titulación. |
| |Pocosensible. Se sigue empleando|
| |para análisis elemental (ejm: |
| |alimentos). |
|Reacción de Biuret |Al tratar con Cu++ en medio |
| |alcalino, los compuestos |
| |con grupos -CO-NH- dan una |
||coloración violeta. |
| |Muy específica; relativamente |
| |poco sensible. |
|Método de Lowry |Reacción en dos fases: |
| |1. Reacción del biuret |
| |2. Tratamiento con reactivo de |
| |fenolesde Folin-Ciocalteu |
| |Muy sensible (muestras de 10 mg) |
| |y sencillo |
| |Resultados variables con |
| |distintas proteínas, pues depende|
| |del contenido en aminoácidos |
||aromáticos. |
|Método de Bradford |La fijación de un colorante (Azul|
| |de Coomassie) a una proteína |
| |modifica las características de |
| |absorción visible de aquél. |
| |Sensible, fácil de practicar y |
||resultados muy constantes |
| | |

Al modificar el entorno de la proteína se hace que pierda su estructura tridimensional, desnaturalizándola, es decir, desplegando la cadena polipeptídica sin romper los enlaces peptídicos. Ahora la proteína será insoluble y no funcional. Para desnaturalizar una proteína se puede modificar el...