quimica

La determinación de la estructura primaria la primera determinación de la secuencia de aminoácido completa de una proteína fue alcanzada en 1953 por Federico Sanger en el caso de insulina, una hormona de proteína de 51 residuos. Desde entonces las secuencias de varios cientos de proteínas han sido descifradas usando varias técnicas basadas en reacciones específicas químicas y procedimientosespeciales para separar e identificar péptidos y aminoácidos. Aunque sea actualmente más fácil determinar las secuencias de proteínas de sus secuencias génicas, todavía requieren la proteína sequencing técnicas en el diseño oligonucleotide sondas para experimentos moleculares genéticos. Ellos son también necesarios para evaluar varias modificaciones de proteínas que ocurren durante o después de labiosíntesis (mirar debajo), que es fundamental para la adquisición estructura apropiada y actividad biológica. Un primer acercamiento a la determinación de secuencia consiste en la identificación residuos de C-terminal y del Terminal de n. El residuo Nterminal puede ser identificado por varias técnicas químicas basadas en el etiquetaje específico por un compuesto, como 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene oel cloruro dansyl o cyanate, con el cual esto forma un eslabón de covalent estable. Asimismo el residuo de C-terminal puede ser identificado por hydrazinolysis después de la conversión de los grupos a-carboxyl de obligaciones de péptido en hydrazides. O bien, estos procedimientos químicos pueden ser substituidos por técnicas enzymatic basadas en la liberación secuencial de aminoácidos solos apartir de los finales de cadenas que usan exopeptidases específico, a saber aminopeptidase y carboxypeptidase.

Uno de los procedimientos más eficientes para determinar la secuencia de aminoácido de una proteína es el método de degradación Edman. En este caso, aminoácidos son quitados secuencialmente, uno por uno, del Término de n sin hender las obligaciones de péptido entre otros residuos deaminoácido de la cadena. El terminal a-amino el grupo primero es reaccionado con phenylisothiocyanate en el medio alcalino para ceder el derivado phenylthiocarbamoyl; este derivado entonces es liberado del resto de la cadena, por el tratamiento ácido, en forma de un compuesto cíclico que reorganiza en la solución acuosa con el derivado phenylthiohydantoin, que más lejos es identificado por técnicascromatográficas. El procedimiento puede ser repetido como muchas veces como es necesario para determinar la secuencia de aminoácido completa de la proteína. Tal análisis recurrente por lo general es realizado en un secuenciador de aminoácido automático. En muchos casos, a saber para analizar proteínas más grandes, es útil hender la cadena de polipéptido en más pequeños péptidos antes sequencing por elmétodo Edman. La hendidura específica puede ser alcanzada cualquiera por productos químicos (p.ej. cyanogen el bromuro, hydroxylamine, la N-chlorosuccinimide) o por enzimas (p.ej. trypsin, pepsin, elastase, thermolysin). Una técnica alternativa para determinar la estructura primaria de proteínas es la espectrometría de masas. Básicamente, la proteína es dada volátil por el tratamiento químico desidechains y fragmentado no expresamente con un haz de electrones. Los fragmentos de proteína son separados según su proporción de-masas-a-precio e identificados. La modificación química de cadenas de lado puede ser evitada en técnicas más recientes y substituida por la ionización de proteínas con un rayo de gran energía de átomos o iones. De otra manera, una solución de proteína en un solventevolátil puede ser rociada directamente en el espectrómetro de masas (electrospray la ionización). Esta técnica es muy sensible (picomole la gama) y exacta.
Covalent las Modificaciones de Proteínas Durante o después de la biosíntesis de la cadena de polipéptido, un número de modificaciones covalent a menudo ocurren. Uno de estos consiste en la hendidura proteolytic de un o varios residuos. Las...