Quimico

Objetivos − Aplicar un método espectrofotométrico para medir la concentración de una proteína. − Conocer el manejo de micropipetas y espectrofotómetros. − Construir curvas de calibración ycomprender su importancia

Espectrofotometría

Son métodos, cuantitativos, de análisis químico que utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias químicas. Se conocen como métodosespectrofotométricos y según sea la radiación utilizada como espectrofotometría de absorción visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja.

RADIACIÓN

EFECTO

TÉCNICA ESPECTROSCÓPICA

INFORMACIÓNOBTENIDA

UV-Visible

Transiciones electrónicas entre los orbítales atómicos y moleculares

Espectroscopía ultravioleta-visible

Existencia de cromóforos y/o conjugación en la molécula apartir de las absorciones observadas.

Infrarrojo

Deformación de los enlaces químicos. Espectroscopía infrarroja
Vibración molecular

Grupos funcionales a partir de las absorciones observadas.Grupos funcionales, subestructuras, conectividades, estereoquímica, etc… a partir de datos de desplazamiento químico, áreas de los picos y constantes de acoplamiento observadas.

RadiofrecuenciasEspectroscopía de resonancia Transiciones de spín electrónico o nuclear en los átomos de la molécula.
magnética nuclear

Espectrofotómetro

Tungsteno (visible)
Deuterio
(UV)

Ley deLambert y Beer
Establece que la absorbancia es proporcional al número de moléculas absorbentes por las que pasa la luz.

A = ε·c·l
A = absrobancia c= concentración l=longitud de la celda ε=coeficiente de extinción o absortividad molar·

?

Coeficiente de extinción o absortividad molar

Es una propiedad intrínseca de los compuestos. Es una medida de absorción de luz de las especiesquímicas a una determinada longitud de onda Unidades

ε=M-1cm-1

Proteínas

Son macromoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos.




Phe

Tyr
Trp

>
295 nm
275 nm

>...