Quimioluminisciancia

Quimioluminiscencia

Fundamento:
La quimioluminiscencia tiene lugar cuando una molécula emite un fotón como resultado de una reacción química en la cual uno de los productos intermedios o finales es llevado a un estado de singlete excitado y retorna a su estado fundamentalmente emitiendo luz. El fenómeno de quimioluminiscencia se produce adiabáticamente, o sea, sin pérdida ni ganancia deenergía en forma de calor. Se podría definir como la producción química de luz. La mayoría de reacciones de quimioluminiscencia es de tipo oxidativo, pues se necesita una gran cantidad de energía para producir un fotón y utiliza oxigeno o peróxido y un sustrato oxidable.
La medida de la potencia radiante de la radiación que es emitida en el curso de una reacción química es equivalente a lamedida de velocidad de reacción multiplicada por el rendimiento cuántico. En la mayoría de reacciones quimioluminiscentes la luz aumenta rápidamente tras la mezcla de reactivos, llega a un máximo y después empieza a disminuir. Las mediciones pueden realizarse en cualquier parte de la curva, durante la parte ascendente o descendente, en el pico máximo o cuando se alcanza la meseta. Aunque enrealidad son más fiables las medidas tomadas en la parte descendente de la curva o en la meseta, pues estas regiones dependen de la eficiencia o rapidez de la mezcla.
Quimioluminiscencia; es, como ya se ha dicho, la producción de luz generada por una reacción química. Sin embargo, existen varios mecanismos a partir de los cuales la luminiscencia es posible. Moléculas con diversas característicasestructurales pueden producir quimioluminiscencia como: [fosfato de adamantil dioxetano + fosfatasa alcalina], [luminol + peroxidasa], [ester de acridina + peroxidasa], [ácido nítrico + ozono] y otros más.
Principio general
En general, una reacción Quimioluminiscente puede generarse mediante dos mecanismos básicos. En una reacción directa, dos reactivos, normalmente un substrato y un oxidante enpresencia de algunos cofactores, reaccionan para formar un producto o intermedio de la reacción, algunas veces en presencia de un catalizador. Después, parte del producto o intermedio pasa a un estado electrónicamente excitado, que puede a continuación relajarse hasta el estado fundamental con emisión de un fotón. El substrato es el precursor QL, que se convierte en la molécula excitadaelectrónicamente, responsable de la emisión de luz, o bien actúa para transferir la energía en la QL indirecta. El catalizador, enzima o ion metálico, reduce la energía de activación y proporciona el ambiente adecuado para la producción de una alta eficiencia QL durante el proceso. Los cofactores son necesarios en ocasiones para convertir uno o más de los substratos en una forma capaz de reaccionar einteraccionar con el catalizador, o para proporcionar un grupo “saliente” eficaz cuando se requiere un marcado para producir el emisor excitado. Por el contrario, la QL indirecta o sensibilizada se basa en un proceso de transferencia de energía de la especie excitada a un fluoróforo. En el caso de moléculas que no pueden emitir directamente QL, este proceso permite transferir su exceso de energía a unfluoróforo que a su vez es excitado, volviendo a su estado fundamental con la emisión de un fotón. Todas estas etapas dan lugar a una gran variedad de aplicaciones prácticas de la QL en la fase sólida, líquida y gaseosa.

Principio de un Ensayo inmunoenzimático por Quimioluminiscencia en fase sólida.
Un anticuerpo monoclonal cubre las superficie de los pocillos y otro anticuerpo monoclonal esetiquetado con peroxidada de equino, el cual es usado como rastreador. Las moléculas del analito presentes en el estándar o el suero son emparedadas entre los dos anticuerpos. Siguiendo la formación del complejo anticuerpo recubierto-antigenoanticuerpo-enzima. Las etiquetas desadheridas anticuerpo- enzima son removidas mediante el lavado. La peroxidada de equino limitado en los pocillos es analizado...