ratones ko

Existen algunas variaciones sobre el procedimiento para producir ratones KO, siendo el
siguiente el ejemplo más habitual.
1. Se aísla el gen que se desea noquear a partir de una genoteca de ratón.Posteriormente se diseña una nueva secuencia de ADN muy pararecida al gen
original y su inmediata vecina, salvo que está cambiada lo suficiente para hacerla
inoperante. Normalmente también seincluye en la nueva secuencia un gen marcador,
que los ratones normales no poseen y que les confiere resistencia a ciertos agentes
tóxicos o produce un cambio observable (p.ej. color o fluorescencia).Las
oportunidades de un suceso de recombinación con éxito son relativamente bajas, de
modo que la mayoría de las células alteradas tienen cambiado solo uno de ambos
cromosomas. se dice que sonheterocigotos.
2. A partir de un blastocisto de ratón (un embrión muy temprano que está formado por
una masa esférica de células indiferenciadas rodeada de células extraembrionarias)
se aíslan lascélulas madre; después se cultivan in vitro. Como ejemplo, tomaremos
una célula madre de un ratón blanco.
3. Las células madre del paso 2 se combinan con la nueva secuencia del paso 1. Esto se
realizamediante electroporación (empleando un pulso eléctrico para transferir ADN a
través de la membrana celular). Algunas de las células madre electroporadas
incorporarán la nueva secuencia en el lugar enel que el gen antiguo estaba en su
cromosoma. A esto se le llama recombinación homóloga. La razón por la que tiene
lugar este proceso es que ambas secuencias, la vieja y la nueva, son muy similares.Utilizando el gen marcador del paso 1, se puede aislar rápidamente las células que
han incorporado la nueva secuencia.
4. Las células madre del paso 3 se insertan en un blastocisto de ratón. Eneste caso
utilizamos blastocistos de ratón pardo. Estos blastocistos se implantan en el útero de
una ratona, para llevar a término la gestación. Los blastocistos contienen dos tipos de
células...