Reaccion De La Polimerasa

LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
Pocos descubrimientos del complejo mundo científico pueden ser considerados realmente revolucionarios. Sin embargo, cuando ocurren se transforma el modo en que se piensa y trabaja en el laboratorio.
Aunque el progreso en las diferentes ramas de la ciencia parece ser lento y su evolución resulta una letanía de “paso a paso”, en el caso de labiología molecular ha sucedido lo contrario. Esta disciplina afortunada con grandes cambios en tiempos relativamente cortos.
Una época nutrida de dichos cambios fue la década de 1970, en la que se produjo un gran numero de descubrimientos, como el de las enzimas de restricción, la clonación de genes en plásmidos y fagos, y las técnicas de hibridación en filtro para ADN y ARN, conocidas como“Southern” y “Northernblot”, respectivamente; así como las invenciones de las técnicas de secuenciación química y enzimática para el ADN.
Otro salto tecnológico ocurrió en 1983, cuando Kary Mullis desarrolló una nueva técnica que hizo posible la síntesis de grandes cantidades de un fragmento de ADN sin tener que clonarlo: la reacción en cadena de la polimerasa (conocida como PCR por sus siglas eninglés). Esta técnica es considerada la más revolucionaria del último cuarto de siglo XX. Con ésta se consigue copiar millones de veces, en un par de horas, una secuencia predeterminada, dentro de una mescla de ADN tan compleja como el propio genoma humano, donde la secuencia de interés representa tan solo una diezmillonésima parte.
Pero la PCR no es solo una técnica exquisitamenteespecífica, sino también muy sensible, pues en principio para practicarla bastaría una sola molécula, por ejemplo, del genoma humano (~6 picogramos), aunque habitualmente se emplean cantidades excesivas de éste (en el orden de hasta microgramos).
Además, por si estos atributos fueran pocos, la técnica es tan robusta que puede usar como substrato para la reacción al ADN, sin tener que purificarlo de sufuente natural, y es común emplear productos biológicos diversos como tejidos embebidos en parafina, semen recuperado de escena de violación, lavados bronquiales, exudados de mucosas, raíces de cabello o cejas, sangre, extendidos citológicos, etc.; muchas veces basta una simple ebullición de la muestra para lisar, liberar y de paso desnaturalizar el ADN, dejándolo listo para la reacción.¿QUE ES LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA?
La PCR es un método in vitro de síntesis de ADN con el que un segmento particular de este es específicamente amplificado al ser delimitado por un par de cebadores o iniciadores que lo flanquea. Su copiado se logra en forma exponencial a través de repetidos ciclos de diferentes periodos y temperaturas de incubación enpresencia de una enzima ADN polimerasa termoestable. Así se obtiene en cuestión de horas millones de copias de la secuencia deseada del ADN.
La PCR es una técnica de biología molecular altamente específica, rápida, sensible y versátil para detectar cantidades íntimas de un cierto ADN específico, posibilitando su fácil identificación y prescindiendo del uso de radioisótopos, indispensables antesde su invención.
Al principio, su inventor enfrento dos problemas fundamentales: uno era que en cada ciclo había que añadir la enzima ADN polimerasa, ya que ésta se inactivaba con las temperaturas tan altas demandadas para desnaturalizar el ADN y exponer las bases nitrogenadas de sus nucleótidos. Otro inconveniente era que había que hacerlo manualmente en tres baños mantenidos a lasdiferentes temperaturas requeridas, pasando rápidamente la muestra de un baño al otro y luego el último, repitiendo esto varias desenas de veces.
El descubrimiento de una bacteria (Thermus acuanticus) que vive en aguas termales junto a geissers a 75°C, la cual tiene una ADN polimerasa que funcionaba bien a altas temperaturas (72°C) e incluso es estable a 94°C, supuso un gran avance, ya que...