Reaccion en cadena de la polimerasa

Reacción en cadena de la polimerasa
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Gel de agarosa teñido con bromuro de etidio que muestra varios productos de PCR obtenidos mediante distintos cebadores, con un bajo nivel de especificidad.
La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés (Polymerase Chain Reaction), es una técnica debiología molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis,[1] cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación, resulta mucho más fácil identificar con una muy altaprobabilidad virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
Contenido[ocultar] * 1 Fundamento e importancia * 2 Reactivos * 3Ciclo de amplificación * 3.1 Inicialización * 3.2 Desnaturalización * 3.3 Alineamiento/Unión del cebador * 3.4 Extensión/Elongación de la cadena * 3.5 Elongación Final * 3.6 Conservación * 3.7 Optimización de la PCR * 4 Tipos de PCR * 4.1 PCR anidada * 4.2 PCR in situ * 4.3 PCR multiplex * 4.4 PCR en Transcriptasa inversa (RT-PCR) * 4.5PCR tiempo real (qPCR) * 4.6 Variaciones de la PCR básica * 5 Aplicaciones * 5.1 Investigación * 5.2 Medicina * 5.3 Paleontología, antropología biológica, y ciencias forenses * 5.4 Agronomía y diversidad * 6 Historia * 6.1 Guerras de patentes * 7 Referencias * 7.1 Citadas en el texto * 7.2 Referencias generales * 8 Enlaces externos |
[editar]Fundamento e importancia
Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que vuelvan a unirse a polimerasas para que vuelvan a duplicarlas. La reacción en cadena de lapolimerasa fue desarrollada por Kary Mullis perteneciente a la Cetus Corporation en California SA, en la década de 1980.
Inicialmente la técnica era lenta, ya que las polimerasas se desnaturalizaban al realizar los cambios de temperatura y era necesario agregar nuevas polimerasas en cada ciclo. Puesto que las temperaturas del ciclo (95 °C en las fases de desnaturalización del ADN) suponen lainmediata desnaturalización de toda proteína, se emplean ADN polimerasas termoestables, extraídas de microorganismos adaptados a vivir a esas temperaturas, restrictivas para la mayoría de los seres vivos. Dichos microorganismos, generalmente arqueas, son: Thermus aquaticus (polimerasa Taq), Pyrococcus furiosus (Pfu), Thermococcus litoralis (Vent) y Thermus termophilus (Tth). Generalmente se empleanmezclas de polimerasas muy procesivas (Taq) con otras con corrección de errores (Pfu, Vent).

Termociclador: aparato en el que se efectúa la PCR convencional.
Hoy, todo el proceso de la PCR está automatizado mediante un aparato llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de reacción para controlar la temperatura necesaria para cada etapa de la reacción (ver más abajo). Muchostermocicladores modernos hacen uso del efecto Peltier, que permite tanto calentar como enfriar los tubos simplemente invirtiendo la corriente eléctrica. Los tubos usados para PCR tienen una pared muy fina, lo que favorece una buena conductividad térmica, permitiendo que se alcance rápidamente el equilibrio térmico. Casi todos los termocicladores tienen un sistema que calienta la tapa de cierre...