Reacciones de identifiacion para carbohidratos

20. Reacciones coloreadas para la determinación cualitativa de azúcares.
Nieves Abril Díaz, Jesús V. Jorrín Novo y José A. Bárcena Ruíz
Dep. de Bioquímica y Biología Molecular, Edificio C-6 (Severo Ochoa), Campus de Rabanales, Universidad de Córdoba,14071 Córdoba, España.

RESUMEN

Las pruebas colorimétricas para la determinación de azúcares se basan en la reacción específica de estoscompuestos con determinados reactivos para dar derivados coloreados. La formación de color se toma como resultado positivo e indica la presencia del compuesto en cuestión, mientras que la no formación de color es indicativo de su ausencia. Para cada prueba se utilizará un control negativo, también denominado blanco de la reacción, en el que el reactivo se añadirá a agua destilada (o solvente adecuado).Aunque en la presente práctica se llevará a cabo sólo la determinación cualitativa de azúcares, las técnicas que se describen pueden, también, ser utilizadas para la determinación cuantitativa de dichas biomoléculas. Es importante que el alumno conozca la estructura y propiedades químicas de los compuestos que se van a utilizar, por lo que se le recomienda que acuda a sus notas de clase o a unlibro de texto de bioquímica general para un mejor entendimiento y aprovechamiento de la práctica y para presentar y discutir los resultados obtenidos en el cuaderno de prácticas. Título corto: Colorimetría de azúcares. Palabras clave: azúcares reductores, pentosas, hexosas, aldosas, cetosas, mono, oligo y polisacáridos.

1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS Hay una amplia gama de métodos colorimétricosque permiten la determinación cualitativa y cuantitativa de azúcares. Aunque son métodos muy generales, algunos de ellos permiten discriminar entre diferentes tipos de azúcares. Así hay métodos de determinación de azúcares reductores, de pentosas y hexosas, aldosas y cetosas, mono, oligo y polisacáridos, etc. En todos ellos el fundamento es similar, y se basa en la reacción del azúcar con otroreactivo, con la formación productos coloreados que se pueden determinar cuantitativamente por espectroscopía visible.

1.1. Reacciones de determinación de furfural e hidroximetilfurfural

1

Las pentosas y hexosas (tanto aldosas como cetosas) en presencia de ácidos minerales (p.ej., ácido sulfúrico) y a temperaturas elevadas sufren procesos de deshidratación originando furfural (derivados depentosas) o hidroximetilfurfural (derivados de hexosas), tal y como se indica en la Fig.1.

H OH- C

H C-OH

3 H2O CHO

H C-OH OH-C H CCH2OH CHO hexosa H OH- C H C-OH

O CH2OH

hidroximetilfurfural 3 H2O O H furfural CHO

H C-OH OH-C H CH CHO pentosa

Fig. 1. Formación de furfurales. Los monosacáridos en caliente y medio muy ácido, sufren una deshidratación que conduce a la formaciónde un anillo pentagonal de furfural o hidroximetilfurfural, según se parta de pentosas o hexosas. Los oligo- y polisacáridos también sufren estas reacciones, ya que el medio ácido favorece la hidrólisis previa del enlace glicosídico. Los furfurales formados se combinan fácilmente con diversos fenoles y aminas, dando reacciones coloreadas.

Estos compuestos, furfural o hidroximetilfurfural,reaccionan con compuestos aromáticos (fenoles, aminas cíclicas o heterociclos) dando productos coloreados. Aunque son pruebas específicas de monosacáridos, los oligo y polisacáridos también dan positivo, ya que en medio ácido se hidroliza el enlace glicosídico. Se disponen de diferentes técnicas, dependiendo del reactivo utilizado (ensayo de Molish, con α-naftol; ensayo de la antrona; ensayo de Bial,con orcinol; ensayo de Seliwanoff, con resorcinol). En la presente práctica se llevará a cabo la determinación cualitativa de azúcares mediante los siguientes ensayos: Molish, Bial y Seliwanoff (Fig. 2) 1.1.1.- Ensayo de Molish: Reacción de furfural e hidroximetil-furfural con αnaftol (Fig. 2), dando lugar a derivados de color púrpura. Es una prueba general de azúcares. 1.1.2.- Ensayo de Bial:...