Reacciones febriles

Suero Control Positivo: Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los antígenos febriles en una suspensión. MATERIALES REQUERIDOS, NO INCLUIDOS • • • Pipetas serológicas Placa de Reacción Agitador

ANTÍGENOS FEBRILES
AGENTE DE DIAGNÓSTICO
SIGNIFICADO CLÍNICO La infección causada por microorganis-mos de diversas especies produce entre otros síntomas una marcada elevación de latemperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis , así como las paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el genero Rickettsias . La infección por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la producción de anticuerpos que pueden ser detectados con el antígeno específico. Debido a la dificultadexistente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el antígeno empleado para la determinación de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual presenta una reacción cruzada con bacterias del genero Rickettsia. La reacción de Huddleson es un método serológico que detecta anticuerpos contra B. abortus, B. melitensis y B. Suis, agentes causales de la brucelosis; también conocida como fiebre de malta ofiebre ondulante por el cuadro febril característico que se presenta. FUNDAMENTO La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de aglutinación macroscópica. CONTENIDO
q

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la hemólisis. MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA Marcar enuna placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se este usando. NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba. 1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02 mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO). 2. Agitar el antígeno a utilizar paratener una suspensión uniforme. 3. Añadir 30 µL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 µL). 4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero. 5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120rpm) durante 2 minutos. 6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica. 7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS El grado de aglutinación se registra como sigue:

Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5 ± 1.0 Tífico “H” - Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0

4+3+ 2+ 1+ -

Aglutinación del 100% de los organismos Aglutinación del 75% de los organismos Aglutinación del 50% de los organismos Aglutinación del 25% de los organismos Aglutinación del 0% de los organismos

q

q q q q

± 1.0 Paratífico “B” - pH: 6.5 ± 1.0 Proteus OX-19 - pH: 6.5 ± 1.0 Brucella abortus - pH: 6.5 ± 1.0
Paratífico “A” - pH: 6.5

Suero control negativo: Suero de conejo elcual no ha sido inmunizado contra ningún antígeno, por lo que no muestra ninguna aglutinación con los antígenos en suspensión.

El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una aglutinación del 50% de microorganismos (2+) Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las diluciones para prueba en tubo como se muestra acontinuación.

VOLUMEN DEL SUERO 0.08 mL 0.04 mL 0.02 mL 0.01 mL 0.005 mL

TITULO 1 : 20 1 : 40 1 : 80 1 : 160 1 : 320

9. Registrar el título del suero en el cual la ultima dilución de una aglutinación sea 2+. PRECAUCIONES 1. Todos los sueros por probar deberán estar totalmente claros y libres de contaminación bacteriana. 2. No caliente el suero antes de probarlo. 3. Agite bien el antígeno...