Reacción en cadena la polimerasa
Páginas: 3 (703 palabras)
Publicado: 10 de enero de 2011
Reacción en cadena de la polimerasa
Desnaturalización
Se trata de una etapa crítica ya que es muy importante que el ADN molde se desnaturalice completamente. Para lograrlo de manera adecuada serecomiendan temperaturas de 94ºC durante 30 segundos a 1 minuto
En la práctica se suele añadir un período de desnaturalización antes de comenzar los ciclos para asegurarnos que se produce a lo largode toda la muestra de ADN. Esta etapa suele ser de 5´a 94ºC.
Después de ello se realiza una incubación de la muestra a altas temperaturas (93-97ºC). Luego las enzimas primero desenrollan ydesnaturalizan la doble hélice del ADN para generar ADN de simple cadena.
OJO: Hay que tener en cuenta que la actividad de la enzima decrece de manera muy rápida a partir de los 95ºC, por lo que a estastemperaturas o superiores es aconsejable disminuir el tiempo de incubación.
Iniciación o hibridación
Secuencias de ADN de simple cadena sintéticas de 20 a 30 nucleótidos se utilizan comoiniciadores de la replicación. Dos secuencias de iniciadores diferentes se utilizan para restringir la región que va a ser amplificada. Un iniciador es complementario a una cadena de ADN al comienzo de la zonade interés; el segundo iniciador es complementario a la secuencia en el ADN de la cadena opuesta al final de la zona de interés.
Los iniciadores son colocados por una ARN polimerasa que sintetizaun pequeño tramo de ARN complementario a una de las cadenas de ADN al comienzo del sitio de replicación, otro RNA polimerasa pone otro iniciador en el lado opuesto de la cadena contraria. Estecomplejo ADN-ARN sirve de sitio de iniciación para la unión de la ADN polimerasa, la enzima que produce la cadena complementaria de ADN.
Todo este proceso se realiza a junto con una bajada de latemperatura (50-65º C)
Elongación de la cadena
Actúa la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la...
Desnaturalización
Se trata de una etapa crítica ya que es muy importante que el ADN molde se desnaturalice completamente. Para lograrlo de manera adecuada serecomiendan temperaturas de 94ºC durante 30 segundos a 1 minuto
En la práctica se suele añadir un período de desnaturalización antes de comenzar los ciclos para asegurarnos que se produce a lo largode toda la muestra de ADN. Esta etapa suele ser de 5´a 94ºC.
Después de ello se realiza una incubación de la muestra a altas temperaturas (93-97ºC). Luego las enzimas primero desenrollan ydesnaturalizan la doble hélice del ADN para generar ADN de simple cadena.
OJO: Hay que tener en cuenta que la actividad de la enzima decrece de manera muy rápida a partir de los 95ºC, por lo que a estastemperaturas o superiores es aconsejable disminuir el tiempo de incubación.
Iniciación o hibridación
Secuencias de ADN de simple cadena sintéticas de 20 a 30 nucleótidos se utilizan comoiniciadores de la replicación. Dos secuencias de iniciadores diferentes se utilizan para restringir la región que va a ser amplificada. Un iniciador es complementario a una cadena de ADN al comienzo de la zonade interés; el segundo iniciador es complementario a la secuencia en el ADN de la cadena opuesta al final de la zona de interés.
Los iniciadores son colocados por una ARN polimerasa que sintetizaun pequeño tramo de ARN complementario a una de las cadenas de ADN al comienzo del sitio de replicación, otro RNA polimerasa pone otro iniciador en el lado opuesto de la cadena contraria. Estecomplejo ADN-ARN sirve de sitio de iniciación para la unión de la ADN polimerasa, la enzima que produce la cadena complementaria de ADN.
Todo este proceso se realiza a junto con una bajada de latemperatura (50-65º C)
Elongación de la cadena
Actúa la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la...
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