Reacción En Cadena Polemizaras
Páginas: 7 (1558 palabras)
Publicado: 3 de mayo de 2012
Reacción en Cadena de la Polimerasa.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un sistema para un único tubo de ensayo para replicación de ADN que permite que una secuencia de ADN determinada sea amplificada de modo selectivo o enriquecida varios millones de veces en unas pocas horas. Dentro de una célula que se encuentra en división activa, la replicación comprende una serie dereacciones mediadas por enzimas que resulta en una copia fiel del genoma completo. Dentro de un único tubo de reacción, la PCR utiliza sólo una enzima indispensable, la Taq polimerasa, para amplificar una fracción específica del genoma a temperaturas en las cuales el ADN todavía permanece como cadenas simples.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras laamplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
Pararealizar la técnica se necesitan:
Los 4 desoxirribonucleósidos-trifosfato (dNTP), sustratos para polimerizar nuevo ADN.
Dos cebadores o iniciadores (primers), oligonucleótidos que son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de 18 a 22, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Deben estar situadosenfrentados y a no mucha distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, es decir, corresponden a los nucleótidos que definen los extremos de la secuencia que se desea replicar.
Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comúnmente como cloruro de magnesio (MgCl2), o algún otro catión divalente. También se puede emplear manganeso (Mn2+), para mutagénesis de ADN mediante PCR,ya que altas concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la síntesis de ADN. Actúan como cofactores de la polimerasa.
Iones monovalentes, como el potasio.
Una solución tampón (buffer) que mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de el ADN polimerasa.
ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas con temperatura óptima alrededor de 70 °C (la más común es lapolimerasa Taq).
ADN molde, que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
Termociclador, el aparato que va a mantener la temperatura necesaria en cada una de las etapas que conforman un ciclo.
La reacción en cadena de la polimerasa es un sistema para un único tubo de ensayo para replicación de ADN que permite que una secuencia de ADN determinada sea amplificada de modo selectivo oenriquecida varios millones de veces en unas pocas horas. Dentro de una célula que se encuentra en división activa, la replicación comprende una serie de reacciones mediadas por enzimas que resulta en una copia fiel del genoma completo. Dentro de un único tubo de reacción, la PCR utiliza sólo una enzima indispensable, la Taq polimerasa, para amplificar una fracción específica del genoma a temperaturas enlas cuales el ADN todavía permanece como cadenas simples.
Durante la replicación del ADN celular, las enzimas primero desenrollan y desnaturalizan la doble hélice del ADN para generar ADN de simple cadena. Luego, la ARN polimerasa sintetiza un pequeño tramo de ARN complementario a una de las cadenas de ADN al comienzo del sitio de replicación. Este complejo ADN-ARN sirve de sitio de iniciaciónpara la unión de la ADN polimerasa, la enzima que produce la cadena complementaria de ADN. Durante la PCR, se utilizan altas temperaturas para lograr que las moléculas se separen en cadenas simples. Secuencias de ADN de simple cadena sintéticas de 20 a 30 nucleótidos se utilizan como iniciadores de la replicación. Dos secuencias de iniciadores diferentes se utilizan para restringir la región que...
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un sistema para un único tubo de ensayo para replicación de ADN que permite que una secuencia de ADN determinada sea amplificada de modo selectivo o enriquecida varios millones de veces en unas pocas horas. Dentro de una célula que se encuentra en división activa, la replicación comprende una serie dereacciones mediadas por enzimas que resulta en una copia fiel del genoma completo. Dentro de un único tubo de reacción, la PCR utiliza sólo una enzima indispensable, la Taq polimerasa, para amplificar una fracción específica del genoma a temperaturas en las cuales el ADN todavía permanece como cadenas simples.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras laamplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
Pararealizar la técnica se necesitan:
Los 4 desoxirribonucleósidos-trifosfato (dNTP), sustratos para polimerizar nuevo ADN.
Dos cebadores o iniciadores (primers), oligonucleótidos que son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de 18 a 22, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Deben estar situadosenfrentados y a no mucha distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, es decir, corresponden a los nucleótidos que definen los extremos de la secuencia que se desea replicar.
Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comúnmente como cloruro de magnesio (MgCl2), o algún otro catión divalente. También se puede emplear manganeso (Mn2+), para mutagénesis de ADN mediante PCR,ya que altas concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la síntesis de ADN. Actúan como cofactores de la polimerasa.
Iones monovalentes, como el potasio.
Una solución tampón (buffer) que mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de el ADN polimerasa.
ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas con temperatura óptima alrededor de 70 °C (la más común es lapolimerasa Taq).
ADN molde, que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
Termociclador, el aparato que va a mantener la temperatura necesaria en cada una de las etapas que conforman un ciclo.
La reacción en cadena de la polimerasa es un sistema para un único tubo de ensayo para replicación de ADN que permite que una secuencia de ADN determinada sea amplificada de modo selectivo oenriquecida varios millones de veces en unas pocas horas. Dentro de una célula que se encuentra en división activa, la replicación comprende una serie de reacciones mediadas por enzimas que resulta en una copia fiel del genoma completo. Dentro de un único tubo de reacción, la PCR utiliza sólo una enzima indispensable, la Taq polimerasa, para amplificar una fracción específica del genoma a temperaturas enlas cuales el ADN todavía permanece como cadenas simples.
Durante la replicación del ADN celular, las enzimas primero desenrollan y desnaturalizan la doble hélice del ADN para generar ADN de simple cadena. Luego, la ARN polimerasa sintetiza un pequeño tramo de ARN complementario a una de las cadenas de ADN al comienzo del sitio de replicación. Este complejo ADN-ARN sirve de sitio de iniciaciónpara la unión de la ADN polimerasa, la enzima que produce la cadena complementaria de ADN. Durante la PCR, se utilizan altas temperaturas para lograr que las moléculas se separen en cadenas simples. Secuencias de ADN de simple cadena sintéticas de 20 a 30 nucleótidos se utilizan como iniciadores de la replicación. Dos secuencias de iniciadores diferentes se utilizan para restringir la región que...
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