reactivo biuret

INFORME DE LABORATORIO No 4 Cuantificacin de protenas por el mtodo de Biuret INTRODUCCIN Las protenas son las macromolculas biolgicas ms abundantes en los organismos vivos, estn presentes en todas las clulas y en todas las partes de estas. Las protenas presentan una gran variedad, ya que cada una puede diferir de la otra, van desde pequeas cadenas polipeptdicas a grandes macromolculas de altopeso molecular. Cumplen diferentes funciones biolgicas, como por ejemplo las protenas son los instrumentos moleculares mediante los que se expresa la informacin gentica y poseen un importante papel en la regulacin del pH .Todas las protenas estn compuestas a partir del mismo conjunto de 20 aminocidos, unidos de forma covalente en secuencias lineales caractersticas (1b). Actualmente existen variosmtodos para reconocer y cuantificar protenas, donde se destaca el mtodo colormetro, el ms usado actualmente, y que consiste en una propiedad intrnseca de las molculas para absorber determinadas longitudes de onda, donde la cantidad de luz absorbida es directamente proporcional a la densidad del medio y la concentracin de la sustancia presente. (2a) OBJETIVOS GENERALES Y ESPECFICOS Conoceralgunos mtodos de reconocimiento y cuantificacin colorimtrica de las protenas y sus fundamentos tericos. Reconocer protenas mediante la presencia de enlaces peptdicos en soluciones a travs del Reactivo de Biuret. Determinacin cuantitativa de la concentracin proteica de una solucin por el mtodo de Biuret. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Se comenz el laboratorio rotulando 8 tubos de ensayo, luego seprocedi a preparar las soluciones siendo adicionados por las pipetas (1.5 ml y 10 ml) y propipetas a los tubos de la siguiente manera al tubo 1 se le agreg 2.0 ml de Nacl 0.9 p/v, al tubo 2 se le agreg 1.8 ml de Nacl 0.9 p/v y 0.2 ml de SAB 5mg/ml, al tubo 3 se le agreg 1.5 ml de Nacl 0.9 p/v y 0.5 ml de SAB 5mg/ml, al tubo 4 se le agreg 1.0 ml de Nacl 0.9 p/v y 1.0 ml de SAB 5mg/ml, tubo 5 sele agreg 0.5 ml de Nacl 0.9 p/v y 1.5 ml de SAB 5mg/ml, tubo 6 se le agreg 2.0 ml de SAB 5mg/ml, el tubo 7 se le agreg 2.0 ml de la muestra problema 1 ( orina diluida 110) y al tubo 8 se le agreg 2 ml de la muestra problema 2 ( clara de huevo diluida 150) . Posteriormente a cada tubo de ensayo se le adicion 2.0 ml del reactivo Biuret y se dejaron reposar a temperatura ambiente por 5minutos. Por ltimo se traspasaron a las cubetas de cuarzo de su capacidad y se ley la Absorbancia de los 8 tubos de ensayo en el espectrofotmetro a 540 nm, cabe sealar que el tubo 1 se utiliz como blanco ya que no contena el analito, permiti colocar el espectrofotmetro en Absorbancia cero a 540 nm. RESULTADOS Una vez que se prepararon las soluciones y se traspasaron a las cubetas de cuarzo se procedia leer la Absorbancia en el espectrofotmetro a 540 nm , dando los siguientes resultados, el tubo 1 dio de Absorbancia 0, presentaba un color celeste, el tubo 2 dio una Absorbancia de 0.073 presentaba un color violeta (de aqu hasta el tubo 6 se aprecia un aumento gradual del color violeta tornndose ms oscuro), el tubo 3 presento una Absorbancia de 0.164 , el tubo 4 presento una Absorbancia de0.320 ,el tubo 5 presento una Absorbancia de 0.382, el tubo 6 presento una Absorbancia de 0.407 (ver figura 2) Los dos ltimos tubos que presentaban la solucin problema tubo 7 ( orina diluida 1 10 ) presento una Absorbancia de 0.053 y el tubo 8 (clara de huevo diluida) presento una Absorbancia de 0.332 , gracias a los datos proporcionados y mediante la ecuacin de diluciones C1 x V1 C2 x V ,calculamos la concentracin de de SAB en mg/ml en los 6 primeros tubos (ver anexo figura 1) Con respecto a la concentracin de protenas en los tubos 7 y 8 fue necesario establecer una ecuacin de la recta (lineal, y m x c) con los datos de los 6 primero tubos para esto fue necesario generar una lnea de tendencia. (ver anexo figura 3) de esta manera el eje y corresponde a la Absorbancia, m es...