Reconocimiento y determinación cuantitativa de proteínas

UNIVERSIDAD METROPOLITANAS DE LAS CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA




LABORATORIO I DE BIOQUÍMICA
Informe de Laboratorio

“Reconocimiento y determinación cuantitativa de proteínas”



Licenciatura en Biología y Pedagogía en Biología
Fecha: 23/05/2014



IntroducciónDentro de las células encontramos diversas macromoléculas, como lo son los hidratos de carbono, los lípidos y las proteínas; estas últimas son las que presentan una mayor cantidad de funciones dentro de la misma célula. Entre las funciones que podremos encontrar de las proteínas están las funciones metabólicas, reguladoras, estructurales, entre otras. Una de las más importantes es que gracias aellas somos quienes somos, dado que componen la secuencia genética de nuestro ADN.

En el práctico realizado a través de la medición de la capacidad de reflejar la luz una proteína específica, seroalbúmina de bovino; esta capacidad se denomina absorbancia y dependiendo de la concentración de proteínas que tengan las muestras variará la absorbancia de la misma. De este modo durante la realizacióndel práctico se buscó poder conocer la concentración de una muestra problema, para poder conocer esto se construirá una curva de calibración y se utilizará la “ecuación de Lamber-Beer”, ésta ecuación es una relación empírica que busca comprobar la relación entre la absorbancia y las propiedades del material atravesado.

Objetivos
Observar la reacción de la proteína en presencia del reactivo deBiuret
Determinar cuantitativamente una proteína utilizando el reactivo de Biuret.
Determinar la concentración desconocida de una proteína utilizando una curva de calibración.
Materiales Y métodos
Los siguientes materiales fueron necesarios para realizar el procedimiento experimental:
Materiales.

Pipeta de 1 mL
Pipeta de 2 mL
Pipeta de 5 mL
Vórtex
Tubos de ensayo
EspectrofotómetroGradilla
Baño de agua caliente

Reactivos.
Muestra Problema
Biuret
NaCl 0,9%
Proteína patrón
Métodos.
Se usaron distintas técnicas para realizar este procedimiento, las cuales se detallas a continuación:

Espectrofotometría: Consiste en medir la cantidad de luz absorbida por una muestra en función de la longitud de onda.

Baño de agua caliente: Consiste en colocar las muestras en unrecipiente con agua caliente, para propiciar alguna reacción.

Procedimiento experimental
Preparación de las muestras:

Paso 1.- Se lavaron todos los materiales con agua corriente.
Paso 2.- Se colocó los tubos en la gradilla, y se le asignó arbitrariamente un número para identificarlos.
Paso 3.- Se les agregó la proteína patrón (las cantidades fueron 1,0 - 0,8 - 0,6 - 0,4 - 0,2 - 0,1 mL).Paso 4.- Se les agregó cloruro de sodio (NaCl 0,9 %) (las cantidades fueron 1,0 - 1,2 - 1,4 - 1,6 - 1,8 mL respectivamente)
Paso 5.- Se les agregó luego 4 mL del reactivo de Biuret a cada uno de los tubos, completando así 6mL de solución en cada uno de ellos.
Paso 6.- Se preparó la proteína blanco (la cual sirvió para calibrar) con 2 mL de NaCl 0,9% y 4mL del reactvo de Biuret.
Paso 7.- Sepreparó la proteína problema (muestra 8, de concentración desconocida) con 2 mL de la muestra y 4 mL del reactivo de Biuret,

Análisis de muestras:

Paso 8.- Se llevaron todas las muestras al Vórtex para realizarles una breve agitación a cada uno.
Paso 9.- Se colocaron todos los tubos en el baño de agua a 50°C durante 5 minutos.
Paso 10.- Transcurrido del tiempo se retiraron los tubos y se dejaronenfriar a temperatura ambiente.
Paso 11.- Se llevaron las muestras al espectrofotómetro; se vació al tubo de cuarzo, con el que trabajó esta herramienta, en primera instancia la proteína blanco, para calibrar la máquina, luego se continuó una a una las muestras de cada tubo, realizando el mismo procedimiento. Finalmente se llevó a la lectura de absorbancia la muestra problema.

Resultados y...