Recuento de bacterias mesofilicas aeróbicas por vaciado en placa

Practica 4
Recuento de bacterias mesofilicas aeróbicas por vaciado en placa
Objetivo:
* Conocer e identificar las bacterias mesofilicas aeróbicas.
* Utilizar la técnica de vaciado en placa como medio de conteo de colonias características de mesofilicos.
Introducción:
Un mesófilico es un organismo cuya temperatura de crecimiento óptima está entre los 15 y los 40ºC (un rango consideradomoderado). Este término es usado sobre todo en el campo de la microbiología.
El hábitat de estos organismos incluye el suelo, el cuerpo de un animal, etc. Su temperatura óptima de crecimiento se encuentra en los 37ºC, la temperatura normal de un cuerpo humano.

Material: | |
1 frasco muestra | 1 vaso p.p. de 1000ml |
4 frascos de dilución | 1 vaso p.p. de 400ml |
3 tubos de dilución |17 tubos de 20x20 |
8 pipetas de 1 ml | 1 termómetro |
4 pipetas de 10 ml | 1 incubadora |
16 cajas petri | 1Cuenta colonias |
1 caja petri para blanco | 1 mechero Fisher |
Medios: |
Medio para métodos estándar marca BD Bioxon (Agar Cuenta Estándar) |

Modo de preparación del medio:
Suspenda 23.5 grs, del polvo en 1000 ml de agua destilada mezclar perfectamente, calentar, agitarfrecuentemente y hervir durante un minuto hasta disolución completa. Distribuir y esterilizar a 121oC durante 15 min.
Para cada tubo necesitamos 13 ml de medio por lo tanto se requiere de 143 ml de medio preparado.
3360.5 / 1000 = 3.36 |
* Operaciones:
23.5 grs. | | 1000 ml |
x | | 143 ml |
23.5 x143 = 3360.5 |
x= 3.36 grs. |

Procedimiento:
1. Homogeneizar la muestraagitando vigorosamente el recipiente.
2. Transferir 10 ml de la muestra a un frasco con 90 ml de diluyente (agua destilada). Homogeneizar la dilución.
3. Efectuar las siguientes diluciones:
a. Serie A: Realizar diluciones usando alícuotas de 10 ml en botellas con 90ml de diluyente.
b. Serie B: Realizar diluciones usando alícuotas de 1 ml en tubos de 9 ml de diluyente.4. Al concluir cada dilución, inocular 1 ml de cada una en dos cajas petri antes de preparar la siguiente dilución.
5. Agregar a cada caja 12 – 15 ml de medio Agar Cuenta Estándar fundido y mantenido a 43°C - 45°C en baño maría.
6. Incorporar el inoculo al medio por rotación de la caja sobre una superficie lisa. Dejar solidificar.
7. Incubar a 35°C durante 24 a 48 hrs.
8. Conayuda de un cuenta colonias contar todas las colonias que se presentan en las cajas petri de acuerdo a las siguientes condiciones:
c. Contar todas las colonias en aquellas cajas que contengan menos de 300.
d. Contar una mitad representativa de la caja, si contiene aproximadamente de 300 a 500 colonias y multiplicar el resultado por 2.
e. Contar una cuarta parte representativa dela caja, si el número en toda la placa es aproximadamente de 500 a 800 colonias y multiplicar por 4.
f. Contar los cuadros mayores de la cuadricula del contador al azar, sacar la media aritmética y multiplicar por 65 el total contado, si el numero es mayor a 800 colonias.
9. Repetir el recuento por la misma persona, una vez concluida la primera lectura de todas las cajas. Evitarcualquier actividad prejuiciosa anotando los resultados de las dos series de lectura en cuadros distintos.
10. Realizar dos series de lecturas del inciso anterior, por una segunda persona siguiendo los mismos lineamientos descritos.
11. Observar cuidadosamente los resultados. Comparar los valores obtenidos por el analista de mayor experiencia con respecto al menos experimentado. Si amboscarecen de experiencia previa, es conveniente repetir el estudio después de algunos meses de trabajo.
12. Llenar el siguiente cuadro y discutir los resultados. (Cuadro # 1)

Cuadro # 1

| Serie A | Serie B |
| Diluciones 10 + 90 ml | Diluciones 1 + 9 ml |
Analista | Dilución | Caja 1 | Caja 2 | Caja 1 | Caja 2 |
| | Recuento | Recuento | Recuento | Recuento |
| | 1° | 2° | 1° |...