Recuento De Microorganismos

TEMA: “MÉTODOS DIRECTOS DE RECUENTO DE MICROORGANISMOS”

MÉTODOS DIRECTOS DE RECUENTO DE MICROORGANISMOS:
En diversos estudios microbiológicos (como análisis de alimentos, de agua de bebida, de productos farmacéuticos o del medioambiente entre otros), se requiere conocer el número de microorganismos presentes en un material con objeto de determinar su calidad. El procedimiento es esencialmenteel mismo que para la medida del crecimiento de las poblaciones de bacterias El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante métodos de medida de la masa total celular, que generalmente es directamente proporcional al número de células, (métodos de determinación del peso, de la actividad del cultivo o métodos turbidimétricos) o por la determinación del número de células.
1.Principales métodos de recuento del número bacterias en una muestra
El número de bacterias puede determinarse directamente por recuento del número total de células o indirectamente por la estimación del número más probable, por filtración o por el recuento de células viables en placa (células capaces de dividirse en un medio de cultivo sólido, también se refieren como unidades formadoras decolonias, UFCs).
1.1. Recuento directo de bacterias al microscopio
Es una técnica para determinar el número total de organismos de una muestra: Se utilizan cámaras de recuento (cámara de Petroff-Hauser) y visualización al microscopio. Es un método rápido del número total de células de una muestra pero no distingue entre viables o no viables.
1.2. Recuento directo con contadores electrónicos
Se utilizael contador Coulter recuenta el número de células suspendidas en un líquido, a su paso por un orificio por donde fluye la corriente eléctrica. Se puede determinar a su vez el tamaño de las células pero tampoco distingue entre viables, muertas o partículas.
1.3. Recuento en filtros de membrana
En este método el recuento se realiza por filtración de un volumen de la muestra a través de un filtrode membrana de tamaño adecuado para retener a las bacterias (0.22-0.45 µm). Una vez filtrada la muestra, el filtro se coloca sobre un medio de cultivo sólido y se incuba. El recuento del número de colonias formadas sobre el filtro determina el número total de bacterias en la muestra filtrada. Es un método útil cuando el número de bacterias presentes en la muestra es muy bajo. Se utiliza confrecuencia para determinar el número de bacterias en agua.
2. Métodos de recuento de bacterias viables en placa
Estos métodos ofrecen la ventaja de cuantificar solo a las bacterias viables presentes en una muestra. Implican la dilución seriada de la muestra en agua, caldo o solución salina, la inoculación de la dilución en medio de cultivo sólido y la incubación durante 24-48 horas a la temperaturaapropiada y en placa son métodos de estimación de bacterias viables en término de unidades formadoras de colonias (UFCs). El número de unidades formadoras de colonias de una suspensión bacteriana puede determinarse mediante dos técnicas:
2.1. Recuento en placa por siembra en profundidad.
Consiste en añadir medio de cultivo fundido y enfriado a 50ºC sobre placa de Petri que contiene una cantidaddeterminada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para mezclar la muestra en el agar. Cuando el agar solidifica se incuban las placas. Las colonias se desarrollan tanto dentro del agar como en la superficie. Es un método generalmente utilizado para el recuento de microorganismos anaerobios facultativos o microaerofilos.
2.2. Recuento en placa por siembra en superficie
Consisteen la siembra de un volumen conocido de la dilución de la muestra sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri. En este método todas las colonias crecen sobre la superficie del medio. Generalmente se utiliza esta técnica para el recuento de bacterias aerobias.

RECUENTO DE LOS MICROORGANISMOS VIABLES TOTALES.
1. Recuento de microorganismos viables totales. (Muestras líquidas u...