Recuento
Tema: Los procesos de centrifugado
Existen dos métodos de separación en centrifugación:
A.- Centrifugación diferencial.
B.- Centrifugación en gradiente dedensidad.
Coeficiente de sedimentación (s)
La velocidad de sedimentación de una partícula depende del campo centrífugo aplicado. Es un parámetro útil para caracterizar una partícula y puede serdeterminada en una ultracentrífuga.
Se define coeficiente de sedimentación (s) como la velocidad de sedimentación por unidad de fuerza centrífuga. Esta depende de la masa y densidad de la partícula, de ladensidad del medio y del coeficiente de fricción, que depende a su vez de la forma de la partícula. El coeficiente de sedimentación(s) es directamente proporcional a la masa de la partícula (m) einversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) de la misma.
S α m/f
La unidad se denomina Svedberg, (S)
1 S= 10-13 seg., en H2O a 20 ºC
La centrifugación diferencial
En este método, eltubo de centrífuga se llena con una mezcla uniforme problema. Tras la centrifugación se obtienen dos fracciones: un pellet que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material nosedimentado. Es una técnica muy útil, sobre todo para aislamiento de células y orgánulos subcelulares. Es un tipo de separación logrado en base al tamaño de las partículas.
Esta técnica consiste ensometer a una muestra heterogénea de partículas a fuerzas de centrifugación crecientes por períodos de tiempo crecientes. Los precipitados obtenidos luego de cada centrifugación estarán enriquecidos en unadeterminada partícula.
Para lograr la separación, los coeficientes de sedimentación de las partículas deben diferir en al menos un factor de tres (moléculas con s mayores precipitan primero).
Lacentrifugación en gradiente de densidad
El método de gradiente de densidad implica la utilización de un soporte fluido, cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior. El gradiente se...
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