recuento

Curso de Certificación de Microbiología (OPS)

Recuento heterotrófico en placas

Donald J. Reasoner, Ph.D.
División de Contaminantes Microbiológicos, WSWRD, NRMRL
Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos
Cincinnati, Ohio 45268
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. Introducción
A. Historia de la técnica derecuento en placas
a. Medio gelatina nutritiva
b. Medio agar
B. Métodos más recientes
a. Recuento en placa estándar s
b. Recuento heterotrófico en placas
1. Definición de bacterias heterótrofas
2. Medios selectivos versus no selectivos para el crecimiento de bacterias
heterótrofas
II.
Usos del recuento heterotrófico en placas
III. Métodos alternativos
A. Método de placa fluida (MPF)
B. Método de placadifusa (MPD)
C. Método de filtración por membrana (PPM)
IV. Consideraciones y beneficios del monitoreo
V. Referencias
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------Resumen:
La medición de bacterias heterótrofas en el agua potable puede proporcionar
información útil a los operadores de plantas de agua, ingenieros sanitarios,supervisores
de la calidad del agua y analistas de laboratorios de calidad del agua. Durante el
tratamiento la densidad bacteriana varía y en la red de distribución se puede monitorear el
deterioro de la calidad a través de los métodos de recuento heterotrófico en placas
(RHP). La aplicación constante del método de RHP seleccionado proporcionará datos
básicos para evaluar cambios en la calidad bacteriana delagua potable. A continuación
se presenta un resumen de los métodos disponibles en los Estados Unidos e información
para optimizar el RHP a través de la elección de procedimientos, medios y tiempo y
temperatura de incubación.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------Revisado el 7 de agosto de 1998 para el Curso de Certificación deMicrobiología (OPS)
USEPA, AWBERC, Cincinnati, Ohio.

1. Introducción
A. Historia de la técnica de recuento en placas
En los Estados Unidos se han usado métodos para detectar y enumerar las
bacterias en el agua desde el inicio de la microbiología sanitaria a principios del siglo XX.
Además de enumerar las bacterias indicadoras (coliformes totales y fecales, Escherichia
coli), se ha usado unprocedimiento del recuento de bacterias para calcular la densidad
general de la población bacteriana en el agua.
a. Gelatina nutritiva. El Dr. Robert Koch (1876) usó la gelatina como el primer
agente gelificante para solidificar el medio líquido usado en el cultivo de las bacterias.
También desarrolló el método de estriado, el método de recuento en placas para el
aislamiento de bacterias y el métodode sesgado para sembrar cultivos puros. El uso de
la gelatina como agente de solidificación permitió obtener muestras para el cultivo en
placas, directamente o en alícuotas diluidas, en el medio gelificado, lo que facilitó el
crecimiento de colonias individuales y el desarrollo de cultivos puros. La gelatina se podía
obtener fácilmente y a un bajo costo pero presentaba dos desventajas. En primerlugar, se
debe incubar por debajo de 28 °C para mantenerla solidificada; el uso de temperaturas
de incubación inferiores de 28 °C no es adecuado para muchas bacterias. En segundo
lugar, muchas bacterias pueden descomponer la gelatina, lo que hace que se licúe e
impida la reproducción de las colonias. Actualmente, la gelatina nutritiva se usa
principalmente para determinar si una bacteria aislada deun cultivo puro puede producir
gelatinasa y licuar la gelatina como una característica bioquímica.
b. Medio agar. Fue por sugerencia de Frau Hesse, esposa de un antiguo auxiliar
del Dr. Koch, que el agar se introdujo como un agente gelificante para el medio de cultivo.
En el Oriente el agar, derivado de algunas algas marinas, se usó como un agente
gelificante. El agar entra en solución a 100 °C...