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introducción

Multiplex PCR es una técnica generalizada biología molecular para la amplificación de múltiples objetivos en un único experimento de PCR. En un ensayo de multiplexación, más de unasecuencia diana puede ser amplificado mediante el uso de múltiples pares de cebadores en una mezcla de reacción. Como una extensión de la utilización práctica de la PCR, esta técnica tiene el potencialde producir un ahorro considerable de tiempo y esfuerzo en el laboratorio sin comprometer la utilidad del experimento.

Tipos de Multiplex PCR
Reacciones de multiplexación se pueden dividir en doscategorías:

1. Plantilla simple reacción PCR
Esta técnica usa una sola plantilla que puede ser un ADN genómico junto con varios pares de cebadores directo e inverso para amplificar regionesespecíficas dentro de una plantilla.
2. Plantilla múltiple de reacción de PCR
Se utiliza varias plantillas y varios conjuntos de cebadores en el mismo tubo de reacción. La presencia de múltiples cebadorespuede provocar la hibridación entre sí y la posibilidad de errores de cebado con otras plantillas.

Primer Parámetros de diseño para Multiplex PCR

Diseño de conjuntos de cebadores específicos esesencial para una reacción multiplex éxito. Las consideraciones de diseño importantes de cebadores se describen a continuación son una clave para la amplificación específica con un alto rendimiento.1. Primer Largo
Multiplex PCR ensayos implican el diseño de gran número de cebadores, por lo tanto, se requiere que el cebador diseñado debe ser de longitud apropiada. Por lo general, los cebadoresde corta longitud, en el intervalo de 18-22 bases se utilizan.

2. Temperatura de fusión
Cebadores con Tm similares, preferiblemente entre 55 ° C-60 ° C se utilizan. Para las secuencias con altocontenido de GC, cebadores con una Tm superior (preferiblemente 75 ° C-80 ° C) se recomiendan. Una variación de Tm entre 3 ° -5 ° C es aceptable para los primers utilizados en una piscina.

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