Reporte Electroforesis

Estimación del Peso Molecular de Fibrinógeno, Albúmina y Hemoglobina con Electroforesis en Gel de Poliacrilamida con Duodecilsulfato de Sodio (SDS-PAGE)

Katherine Salazar S. i, Jacqueline Solano F.ii

Resumen: Estimación del Peso Molecular de Fibrinógeno, Albúmina y Hemoglobina con Electroforesis en Gel de Poliacrilamida con Duodecilsulfato de Sodio (SDS-PAGE). La electroforesis es un métodoanalítico que consiste en el transporte de partículas a través de un disolvente mediante un campo eléctrico, sirve como método de separación de distintas mezclas. La migración se ve influenciada por su carga, peso molecular y estructura tridimensional. La técnica que se empleó para determinar el peso molecular de las muestras (albúmina, fibrinógeno y plasma) al compararlas con marcadores de pesomolecular conocido, fue la electroforesis en gel de poliacrilamida. Se elaboraron los geles: compactador y separador, se agregaron las muestras: tres con agente reductor y dos con agente no reductor; la cámara de electroforesis se llenó con buffer de cámara y se conectó a un voltaje. Transcurrido el tiempo, aparecieron las bandas, se separó el gel separador del vidrio, se colocó en mezcla 1:1 desolución fijadora, azul de Coomassie y se decoloró para obtener un gel transparente con bandas coloreadas. La albúmina, el plasma, y el fibrinógeno sin reducir presentaron pesos moleculares de 75,86; 79,29; 200,63 respectivamente. En su forma reducida el plasma obtuvo un peso de 72,58 y el fibrinógeno se separó en tres bandas de 140,86; 86,61; 82,88. Se concluye que la electroforesis de proteínas engel de poliacrilamida es una herramienta útil para la determinación de diversas propiedades de las proteínas como el peso molecular y la determinación de sus subunidades siempre que las mismas presenten diferente peso molecular.
Palabras clave: electroforesis en gel, peso molecular, movilidad relativa, fibrinógeno, albúmina, hemoglobina.

La electroforesis es una técnica de separación quefundamenta el transporte de iones por medio de una disolución por acción de un campo eléctrico (García 2000). Para lograr esto se debe aplicar una diferencia de potencial eléctrico entre dos electrodos con cargas opuestas, los iones presentes en la solución se mueven al electrodo correspondiente: los aniones se dirigen hacia el ánodo (electrodo positivo) y los cationes se mueven hacia el cátodo (electrodonegativo) (Fuentes et al. 1997)
Existen varios tipos de materiales y técnicas en los que se puede llevar a cabo este procedimiento analítico. Uno de ellos es la electroforesis en acetato de celulosa. Este es muy sencillo de utilizar y ofrece una resolución aceptable. Otro método empleado es la electroforesis en gel. Para este método se usan distintos geles como almidón, poliacrilamida, agarosa,entre otros que se usan como medios de soporte y ofrecen una resolución inestimable. La electroforesis en gel se usa en laboratorios clínicos para separar proteínas, ácidos nucleicos, lipoproteínas e isoenzimas (Freifelter 1981).
La electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de SDS (SDS-PAGE) es el procedimiento más utilizado. En cuanto a la elaboración del gel, se prepara mediante lapolimerización del monómero acrilamida con el monómero de entrecruzamiento N,N’-metilbelinbisacrilamida, si se llegan a variar las concentraciones del monómero y del monómero, se pueden conseguir mayor diversidad en cuanto al tamaño de los poros, cuya amplitud puede ajustarse para optimizar la calidad de la separación de las muestras (González 2004).
La técnica SDS-PAGE, consiste en la aplicaciónde una sustancia detergente cargado electronegativamente (duodecilsulfato sódico). Al igual que cualquier otro detergente el SDS se una a las partes hidrofóbicas de las proteínas, lo que provoca la estructura tridimensional. De esta manera, las proteínas se desnaturalizan y al estar cargadas negativamente migran hacia el polo positivo. Se puede utilizar un agente reductor para que llegue a...