Reporte Gen tica microbiana

Genética microbiana:
Transferencia de material genético (Conjugación,Transformación), aislamiento de plásmidos, enzimas de restricción y Elestroforesis
Introducción
La información genética de una bacteria puede variar por dos mecanismos diferentes: mutación o cambio en la secuencia que producen cambios en la información genética; y por transferencia horizontal de material genético, que es latransmisión de genes entre dos células que conviven en un mismo ambiente o que no están relacionadas entre sí por un vínculo de descendencia directa. A la transferencia de información genética de una célula madre a las hijas se le denomina transferencia vertical.
Existen tres métodos de transferencia horizontal de información genética: la transformación, la transducción y la conjugación.-Conjugación: es la transferencia directa de información genética desde una bacteria donadora a otra receptora utilizando el pili sexual como canal de paso del material genético. Para que una bacteria sea donadora debe contener un plásmido conjugativo que se suele llamar plásmido F.
-Transducción: se produce cuando un bacteriófago infecta una célula bacteriana y en el momento de formar los nuevos virionesresultantes del ciclo de vida del fago, éstos incluyen en su material genético parte del material genético de la bacteria. De esta forma, cuando un fago que lleva material genético de una bacteria infecta a otra, esta pequeña cantidad de material genético de la primera bacteria se transmite horizontalmente a la segunda.
-Transformación: consiste en la captación de material genético que estélibre en el medio por una célula bacteriana que posteriormente lo incorpora a su propio material genético y lo expresa como propio. El material genético libre puede proceder de diferentes orígenes tales como restos celulares de bacterias lisadas, plásmidos liberados por otras células, entre otros. Para que una célula pueda tomar material genético del medio debe encontrarse en un estado fisiológicoespecial denominado competencia. Por tanto, una célula competente es aquella que puede ser transformada genéticamente.
En el caso de la transformación el plásmido se usa como vector de clonación y debe tener como características: su propio origen de replicación y por tanto la capacidad de replicación autónoma, debe tener sitios de clonación múltiple que permitan la apertura del DNA con enzimas derestricción lo que hace posible la clonación de insertos de DNA en la forma y orientación determinada y por último debe poseer marcadores genéticos seleccionables que permitan aislar las células hospedadores que contengan el vector.
A través de la incorporación del plásmido al cromosoma bacteriano se pueden usar técnicas de purificación. El DNA de un plásmido recombinante presente en una bacteriase aísla por un método que consiste en lisis bacteriana, precipitación de proteínas y DNA genómico, y finalmente precipitación del DNA plasmídico, posteriormente esté se puede analizar por electroforesis.
La mayoría de los plásmidos contienen el sitio de clonación múltiple dentro el gen de la β-galactosidasa lo que permite la interrupción e inactivación de este gen cuando un DNA inserto se clonaen esta región.
Algunos microorganismos no utilizan la lactosa como tal, sino cuando ésta es hidrolizada en glucosa y galactosa. La ß-galactosidasa hidroliza la lactosa a partir de un substrato sintético denominado X-gal. Si la galactosa no está presente en el medio de cultivo, el microrganismo usa solamente muy poco de ß-galactosidasa. En cambio, en presencia de lactosa, usa la ß-galactosidasaabundantemente. Cuando la ß-galactosidasa entra en contacto con el producto X-gal, ella lo convierte en un producto de color azul. Esta enzima es codificada por el gen LacZ.
En la práctica se transformó a una bacteria con el vector recombinante que contiene el transgen ompA-βlactamasa, este gen se encuentra inactivado hasta que se agregue IPTG, posteriormente se hará su análisis por medio de...