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INVESTIGACION Y RECUENTRO DE ENTEROBACTERIACEAE LACTOSA- POSITIVA (COLIFOTMES)
Las Enterobacteriaceae lactosa-positivas o grupo coli-aerogenes constituyen un grupo de bacterias que se definen más por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios, taxonómicos. Pertenecen a la familia enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con predicción deácido y gas, más o menos rápidamente en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubación comprendida entre 30-37ºC.
Son bacilos gram negativos, aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados. Del grupo «conformes» forman parte
varios géneros:
Escherichia.
Enterobacter.
Klebsiella.
Citrobacter.
Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero también otrosambientes: suelo, plantas, cáscara de huevo, cte. Aunque su especificidad como indicadores no son buenos, se suelen usar como índice de contaminación fecal por:
Su frecuencia en heces.
Su fácil detección en el laboratorio.
Sus características semejantes, en algún aspecto, a las de algunos miembros patógenos de la familia Enterobacteriaceae.
Dentro de este grupo, son los coliformes fecales los quetienen significado sanitario y por consiguiente, los que más interesan en el análisis microbiológíco de alimentos.
Se considera a los coliformes fecales como presuntos Escherichia coIi. Sus principales características son:
Aptitud para desarrollarse entre 43´5-45´5C.
Capacidad para crecer en presencia de sales biliares.
Facultad para producir índole en agua de peptona.
En general, niveles altosde Enterobacteriaceae lactosa-positivas (coliformes) indican manipulación y elaboración deficientes de los alimentos.
INVESITIGACION Y RECUENTO DE ENTEROBACTERIACEAE LACTOSA-POSITIVAS (COLIFORMES)
Investigación y recuento en medio líquido.
Para la detección de Enterobacteriaceae lactosa-positivas (conliformes), se aprovechan ciertas características que las diferencian de otrasEnterobacteriaceae como, por ejemplo, su capacidad para fermentar la lactosa con producción de ácido y gas en presencia de sales biliares.
Material:
Tubos de ensayo de 16x160 mm.
Gradillas.
Pipetas estériles de 10 y 1 ml.
Estufa de cultivo.
Medio de cultivo:
Caldo lactosado biliado verde brillante (Brilliant Green Bile Lactose: BGBL)
Composición:
- Peptona 10 g.
- Lactosa 10 g.
- Bilis de buey 20 g.- Verde brillante 0,0133 g.
- Agua destilada 1.000 ml.
Disolver. Ajustar el pH a 7,4. Distribuir en tubos de ensayo con campana Durham a razón de 10 ml. Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 20 minutos.
Técnica
Se preparan en una gradilla tres series de tres tubos cada una. Cada tubo contendrá 10 ml de BGBL (véase apartado anterior).
a) En cada uno de los tubos de la primera serie, sevierte 1 ml de la dilución de la muestra al 1: 10. (-1).
b) En cada uno de los tubos de la segunda serie, se vierte 1 ml de la dilución de la muestra al 1: 100 (-2).
c) En cada uno de los tubos de la tercera serie, se vierte 1 ml de la dilución de la muestra al 1: 1.000 (-3).
d) Incubar las tres series a 31 + 1ºC, haciendo lecturas a las 24 y 48 horas. La reacción es positiva cuando se producedesprendimiento de gas en la campana Durham, por lo menos en 1/10 parte de su volumen, como consecuencia de la fermentación de la lactosa con formación de ácido y gas en presencia le sales biliares a una temperatura comprendida entre 30-37 'C.
Con el número de tubos positivos en cada serie, se recurre a la Tabla del Número Más Probable (NMP), donde se obtendrá el recuento por gramo o mililitro demuestra.
Investigación y recuento en medio sólida
En la técnica que se describe a continuación se utiliza el medio selectivo agar biliado rojo neutro cristal violeta (Violet Red Bite Agar: VRBA).
Material:
Placas de Petri estériles de 90 mm de diámetro.
Pipetas estériles de 1ml.
Estufa de cultivo.
Cuenta colonias.
Medio de cultivo (preparación del medio de cultivo).
Agar biliado-rojo...