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Páginas: 8 (1841 palabras) Publicado: 20 de marzo de 2014
Universidad del Valle de Guatemala
Facultad de Ciencias y Humanidades
Departamento de Química
Análisis Instrumental Avanzado
Auxiliar: Yunuen Soto












Práctica No. 02
Cuantificación de glucosa en suero oral por Cromatografía HPLC
















Laura Estrella Molina Ayala, 08953
Fecha de realización: 21 de febrero del 2014
Fecha de entrega: 28 defebrero del 2014
I. SUMARIO
El objetivo de la práctica fue trabajar con una técnica cromatográfica de HPLC, con el fin de cuantificar azúcares en productos comerciales como el suero oral, trabajando con un detector de índice de refracción. Se utilizó un equipo de Cromatografía Líquida de Alta Definición (HPLC), MARCA, cromatógrafo de Índice de Refracción marca Agilent modelo 1100; unautomuestreador Agilent G1329A, columna Aminex BioRad HPX-87P y una balanza analítica OHAUS Analitical Plus. La cristalería involucrada fueron balones aforados KIMAX de 50±0.2 mL. Se utilizó de reactivos, glucosa Merk con una pureza de 99.699%, acetonitrilo como fase móvil con una pureza de 99.8% y suero oral Pedialyte. Se realizaron 6 estándares de glucosa a distintas concentraciones para elaborar una curva decalibración, en triplicado. Con los datos obtenidos se presentó una ecuación de la recta de {concentración [%p/v] = (4*10-7)*(área del pico [nRIU*s]) + 0.0376}, con un coeficiente R de 0.9977. La concentración de glucosa en el suero oral obtenida fue de (1.52728±4.17186*10-7)%p/v, con un valor teórico de 1.088%p/v, presentando un porcentaje de error de (40.3754±0.000011)%. Sin embargo no se puedeconcluir que esta concentración es verídica debido a que el producto se mantuvo en refrigeración un tiempo indeterminado antes de su uso. La principal fuente de error fue la cristalería y el pesado del material que se pudo haber perdido a la hora de disolverlo, por lo que el error tiene mayor probabilidad de presentarse.
II. OBJETIVOS
A. Objetivo general
Utilizar la técnica de cromatografíaHPLC para cuantificar azúcares en productos comerciales como el suero oral, utilizando detector de índice de refracción.
B. Objetivos específicos
Utilizar el equipo de Cromatografía Líquida de Alta Definición (HPLC) marca Agilent model 1100 y conocer el funcionamiento del detector de índice de refracción y del automuestreador.
Aprender a programar los muestreos en el software del equipo paratriplicado.
III. Marco teórico
La Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución, HPLC, se conoce como una de las técnicas más importantes para purificar compuestos y analizarlos en la mayoría de los laboratorios químicos. Esta técnica presenta muchas ventajas, como la velocidad de elución, la capacidad para separar compuestos termo-lábiles y la alta eficiencia, como su nombre lo indica. El equipoconsiste en un sistema de inyección, un reservorio para el disolvente, una bomba peristáltica, una columna, un detector y un aparato de registro. (Waller, 2001)
La cromatografía HPLC se utiliza para identificar, cuantificar y aislar los componentes de una mezcla. Para purificar una mezcla, se debe inyectar un pequeño volumen de la muestra en la columna y eluirlo con una fase móvil apta para elcompuesto. Las eluciones pueden ser obtenidas mediante dos composiciones de disolventes: constante y variable. Los disolventes de composición constante se refieren a un modo isocrático, mientras que los disolventes con composición variable son los del modo gradiente. Estos componentes eluidos de la columna se pueden detectar por medio de luz ultravioleta, fluorescencia, índice refractario ydetección electroquímica. (Waller, 2001)
IV. RESULTADOS
Cuadro No. 1: Promedios de las funciones de la Ecuación de la Recta y de Desviación Estándar
Función
Resultado
Ecuación de la Recta
Pendiente (%/NRIU*s)
4x10-7
y=(4x10-7)x+0.0376
Coeficiente R
0.9977


Cuadro No. 2: Concentración de Glucosa en Muestra
Concentración Teórica –Suero Oral [%p/v]
Concentración Experimental [%p/v]
%...
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