Resumen

Vol. 53 No. 1 2008

REVISTA - CUADERNOS

A R T Í C U LO S O R I G I N A L E S

UMSAgen, método para la extracción simultánea de RNA y DNA para diagnóstico molecular
Ricardo Amaru*, Rosario Peñaloza*, Hortencia Miguez*, Gina Torres*, Heriberto Cuevas*.

RESUMEN
INTRODUCCIÓN El RNA y el DNA son materiales genéticos de la célula cuya extracción es útil para la medicina moderna. Actualmenteexisten varios métodos de extracción de RNA y DNA por separado y a costos altos. En este trabajo se describe el método UMSAgen como alternativa para la extracción simultanea de RNA total y DNA genómico para diagnósticos moleculares. MATERIAL Y MÉTODOS Se obtuvieron veinte muestras de médula ósea de pacientes con leucemia mieloide crónica. Los leucocitos fueron separados de los glóbulos rojos contampón de lisis. Aproximadamente 3 x 106 de células fueron lisadas en guanidio y conservadas a -20 ºC hasta el momento de la extracción del RNA y DNA. Se realizaron extracciones con 3 diferentes métodos: a) El método comercial Quiagen para el RNA total, b) el método clásico fenol-cloroformo para el DNA genómico y c) el método UMSAgen para extracción simultanea de RNA y DNA. RESULTADOS La purezadel RNA total y DNA genómico extraídos por el método UMSAgen es similar a la extraída con el Kit Quiagen para el RNA y la técnica clásica para el DNA. La evaluación realizada por electroforesis en agarosa y la amplificación del daño molecular BCR-ABL y JAK-2 V617F, por RT-PCR y PCR respectivamente, fue exitosa. CONCLUSIÓN El método UMSAgen es una alternativa fácil y económica para la extracción deRNA total y DNA genómico en diagnóstico e investigación molecular. PALABRAS CLAVES: Rev. Cuadernos 2008, Vol. 53 No.1(Pags. 38 - 43). RNA, DNA, extracción, PCR, RT-PCR y electroforesis en agarosa.

INTRODUCTION The RNA and the DNA are genetic materials of the cell. The RNA/DNA extraction is necessary in modern medicine. Several RNA/DNA isolation methods exist but they are very expensive andtherefore not applicable in our country. In this work, we describe the UMSAgen method as an alternative for simultaneous total RNA and genomic DNA extraction for molecular diagnosis. MATERIAL AND METHODS Twenty bone marrow samples of chronic myeloid leukemia patients were obtained. The leukocytes were separated from the erythrocytes with lyses solution; 3x106 cells were lysed in guanidio solution andconserved at -20ºC until the extraction procedure. The extraction of nucleotide acids was realized by 3 different methods: a) commercial method QuiagenTM for RNA extraction, b) classic method (phenol/chloroform) for DNA extraction and c) UMSAgen method for simultaneous RNA/DNA extraction. The two first methods were used as a control test for UMSAgen. RESULTS The quality and quantity of total RNA andgenomic DNA obtained by the UMSAgen method were similar to that of the QuiagenTM Kit and the classic method, respectively. The ABL-BCR and JAK-2V617F amplification by RT-PCR and PCR were successful. CONCLUSIONS The UMSAgen is an easy and inexpensive altrernative method for total RNA and genomic DNA extraction in diagnostic and biomolecular research. KEY WORDS : Rev. Cuadernos 2008, Vol. 53No.1(Pags. 38 - 43). RNA, DNA, extraction, PCR, RT- PCR and electrophoresis.
* Unidad de Biología Celular, Departamento de Ciencias Funcionales, Facultad de Medicina, UMSA, La Paz, Bolivia Referencias: Ricardo Amaru: ricardo_amaru@yahoo.com

ABSTRACT

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UMSAgen método para la extracción simultánea de RNA y DNA para diagnóstico molecular

REVISTA - CUADERNOS

Vol. 53 No. 1 2008INTRODUCCIÓN La extracción y manipulación del material genético de las células eucarióticas representado por el RNA y el DNA es rutina de la medicina moderna. El RNA es producto de la transcripción de genes1, descubierto por Alexander Rich y David Davies en 19532, su rol en la síntesis de proteínas fue descrito en 19393 y posteriormente el mecanismo de su síntesis fue descrito por Severo Ochoa4. El RNA...