Revision Dela Secuencia Del Dna (Tr)

Revisiones trimestrales de Biofísica 35, 2 (2002), pp 169-200. "2002 Cambridge University Press
traducción: 10.1017/S0033583502003797 Impreso en el Reino Unido
una revisión de las técnicas de secuenciación de ADN
Lilian TC Franco: a1, Emanuel Carrilho2 y Tarso BL Kist3 *
1Centro de Biotecnología, Universidad Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS , el Brasil y el
Instituto deBiofõ sica Carlos Chagas Filho, CCS, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de biof.ufrj.br)!
Janeiro, RJ,Brasil (E-mail: lila
2Instituto de Quo mica de Sa4 o Carlos , Universidade de São Paulo Sa4, Sa4 o Carlos, SP, Brasil
(E-mail: emanuel iqsc.sc.usp.br)
3Departamento de Biofõ sica, Instituto de Biocie # ncias, Universidade Federal do Rio Grande do Sul,91501!
± 970, Porto Alegre,RS, Brasil (E-mail: orion.ufrgs.br

tarso)...1 Resumen Introducción 169 2 170 3 método de Sanger y otros métodos enzimáticos 170
3.1 Enfoque al azar 171 3.2 Enfoque Directo 171 3.3 La tecnología enzimática 175 3.4 Preparación de muestras 175
3.5 Etiquetas y etiquetado de ADN 176 176 3.5.2 3.5.1 Radioisótopos detección quimioluminiscente 176
3.5.3 tintes fluorescentes 177 3.6 Fragmento deseparación y análisis 180 3.6.1 Electroforesis 180
3.6.2 Espectrometría de masas - una alternativa 182 4. Maxam y Gilbert y otros métodos químicos 183
5. Pyrosequencing secuenciación ± ADN en tiempo real por la detección de PPi liberado 187
6. molécula individual de secuenciación con exonucleasa 190 7. Conclusión 192
8. Agradecimientos 192
9. Referencias 193
1. Resumen de
los cuatromejores conocidas técnicas de secuenciación de ADN se reseña a importantes cuestiones prácticas cubiertas son de lectura de longitud, velocidad, precisión, rendimiento, costos, así como la automatización de la manipulación de las muestras y preparación Los métodos revisados ​​son:.. (i) el método de Sanger y su más importante variantes (métodos enzimáticos), (ii) el método de Maxam y Gilbert yotros métodos químicos, (iii) el método thePyrosequencingTM ± secuenciación de ADN en tiempo real por la detección de pirofosfato liberado (PPi), y (iv) sola molécula de secuenciación con exonucleasa ( digestión de exonucleasa de una sola molécula compuesta de una sola hebra de desoxinucleótidos marcados con fluorescencia). Cada método se describe brevemente, la literatura actual que está cubierto,ventajas, desventajas, y las posibles aplicaciones de cada método se discuten.

2. Introducción
técnicas de secuenciación de ADN son herramientas clave en muchos campos. Un gran número de diferentes ciencias están recibiendo los beneficios de estas técnicas, que van desde la arqueología, la antropología, la genética, la biotecnología, la biología molecular, ciencias forenses, entre otros. Unarevolución silenciosa y notable está en marcha en muchos disciplinas, la secuenciación del ADN. ispromoting nuevos descubrimientos que revolucionan las bases conceptuales de muchos campos al mismo tiempo cuestiones nuevas y muy importantes están emergiendo con estos desarrollos, como las cuestiones de bioética y las cuestiones relacionadas con la salud pública y la seguridadhará.
En esta revisiónse seguir el desarrollo cronológico de los métodos. Vamos a empezar en la Sección 3 con los métodos desarrollados por Sanger y sus colaboradores en la década de 1970. El método de Maxam y Gilbert y otros métodos químicos se examinan en la Sección 4. El método PPi ± basado en la detección de PPi liberado en la incorporación de nucleótidos durante la extensión de la cadena por la polimerasa ± seexamina en la sección 5. Los métodos basados ​​en la detección de moléculas individuales se examinan en la Sección 6. Finalmente, las observaciones finales se dan en la Sección 7.
3. método de Sanger y otros métodos enzimáticos
El primer método descrito por Sanger y Coulson para la secuenciación de ADN fue llamado `positivo y negativo '(Sanger y Coulson, 1975). Este método utiliza Escherichia...