Revivificación de cepas





NOMBRE: Esperanza Sánchez Rodríguez
FECHA INICIO PRÁCTICA: 17/09/2013
FECHA FIN PRÁCTICA: 17/09/2013
PRÁCTICA 1: Revivificación de las cepas

OBJETIVO: El objetivo de esta práctica esla revivificación de 3 cepas, A, B, C y de una cepa de Echerichia Coli (E. coli) de perla de congelación, en tubos de ensayos.

CARACTERÍSTICAS DE LAS CEPAS:
Las cepas A, B y C se tratan de cepasque se encuentran en glicerol, contenidas en ependors. Las cepas A, B y C son las siguientes:
Cepa A E. coli ( 9A-37 Plasmido 500 bp)
Cepa B E. coli (60.3 Plasmido 1260 bp)
Cepa C E. coli (T L2Clon16 Plasmido 1300 bp)
Estas cepas se encuentran en glicerol al 20% (contenidos en un espendorf), porque es un agente crioprotector. Estas sustancias protegen del daño que se pueda producir en lascélulas microbianas en el momento de la congelación.
En el caso de la E. coli de perla de congelación se utiliza para realizar un control negativo ya que se supone que no tiene plasmidos.MATERIALES Y REACTIVOS:
MATERIALES
REACTIVOS
Espátula
Agua de peptona
Balanza
Agua destilada
2 erlenmeyers
Glicerol con cepa A
Probeta de 100 mL
Glicerol con cepa B
Papel dealuminio
Glicerol con cepa C
Cinta de autoclavar
Tarro con E. coli de perla de congelación
Autoclave

Gradilla

Mechero burner

1 Tubos de ensayo por persona (excepto grupo c 2 tubos/persona porqueprepara también E.coli en perla)

Vaso de precipitados

Pinzas

Estufa


CÁLCULOS PREVIOS
Cálculos para prepara 80 mL de agua de peptona (PW).
En la etiqueta del bote de PW dice que hayque pesar 20 g por cada litro así que:



Con este cálculo ya se sabe que hay que pesar 1.6 g de agua de peptona para preparar 80 mL.




PROCEDIMIENTO
Primero se cogen dos matraceserlenmeyers, se enjuagan con agua destilada (no lavar con jabón, ya que mata a los microorganismos) y se pesan 1.6 g de PW en cada uno de ellos.
A continuación, con una probeta (previamente lavada) se...