Ruptura Celular

El estudio de la ruptura celular de Staphylococcus aureus

Resumen: Con el fin de preparar las paredes celulares de estafilococos lo más libre posible de organismos intactos pero con químicos mínimo y la degradación mecánica, una rápida método turbidimétrico se desarrolló para medir la proporción de los estafilococos
roto por agitación con perlas de vidrio. El ensayo duró menos de un minuto,y se
utilizado para determinar la concentración de bacterias y la velocidad y el tiempo de agitación que dio los mayores rendimientos de la célula a pie en el menor tiempo posible.
Cuando las suspensiones bacterianas se agitan con perlas de vidrio de la turbidez
disminuye (Curran & Evans, 1942) y el recuento viable baja constantemente de acuerdo
a una ley logarítmica (King& Alexander, 1948). Esto parece ser debido a la
ruptura mecánica de los organismos, como las paredes celulares de las bacterias explosión se puede separar de los contenidos citoplásmicos soluble por centrifugación (Cooper, Rowley y Dawson, 1949; Salton & Horne, 1951). Recientemente se ha encontrado (Cooper pocos, y Rowley, 1952) que cuando los estafilococossensibles a la penicilina se interrumpe rápidamente en un medioque contiene formol ("Medium A ',
ver más abajo) el componente de unión a penicilina presentes en los organismos (Rowley,
Cooper, Roberts & Lester Smith, 1950) es retenido en la pared celular, mientras que la ruptura en agua destilada el único que da las paredes de células inactivas. Con el fin dedeterminar la condición óptima para la ruptura, por un método turbidimétrico rápido se desarrollópara estimar el número de bacterias alteradas. Tenía la ventaja
de permitir un control sobre el terreno de la estimación que se llevó a cabo enmenos de un minuto. Así, al menos el 98% de los organismos puede ser roto sin permitir que el suspensión a temblar o estar de pie más de lo necesario, para que mecánicos y la degradación química de las paredes celulares se redujo al mínimo. Elturbidimétricotasa de método y de los factores que afectan a algunos de ruptura de los estafilococos son se describe a continuación.
MÉTODOS

Preparación de las suspensiones bacterianas. El organismo utilizado fue una de Cowan tipo I1 sensibles a la penicilina azcTe21s Staphytococcus gentilmente por el Dr.Hobbs del Laboratorio Central de Salud Pública, Colindale. Después de crecer en lacarneagar tríptico digerir durante 16 horas. a los 87 'los organismos se recolectaron en agua destilada agua, pasa a través de un N º 1 embudo de vidrio sinterizado de porosidad del filtro para eliminar partículas de agar y se lavó ocho veces con agua destilada.

Los aparatos utilizados para la interrupción bacteriana. A 'Microid de frasco de agitación (Sres. Griffin y Tatlock, Londres) osciló una carga máximade cuatro temblores tubos (cada una pesa 100 g. de contenidos) a una frecuencia variable continua de hasta 45 ciclos / seg., o dos tubos de hasta 58 ciclos / seg. Los tubos de agitación, 140 mm. x 80 mm. Y con una hilera de hendiduras a cada lado para asegurar turbulencia mientras se agita, se cerraron con tapones de vidrio. Los tubos de contenidos
20 ml. suspensión debacterias y 20 g. cuentas 'Ballotini' de vidrio (los señores Chance
Bros., Smethwick, Inglaterra, 0-1-0.2 mm. diam., grado 12 "). Los tubos se fijada en el agitador en posición horizontal y vertical, con una sacudida amplitud de 2,5 cm.
La frecuencia de agitación se determinó de la siguiente manera. Un imán de barra se anclada en el brazo temblando cerca del núcleo de hierro de un solenoide de aproximadamente 2.000 bobinas que se conectaa la entrada Y de un osciloscopio. Un oscilador calibrado conectado a la entrada X se fijó a una frecuencia conocida y la velocidad del agitador fue ajustada continuamente para esta frecuenciadurante el temblando por el mantenimiento de la única figura Lissajou estacionaria. sin constante ajuste de la frecuencia de la coctelera era susceptible de variar en + Ox5 ciclos / seg. Y...