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Caracterización de los buffer fosfatos utilizados en la preparación de solución de hemoglobina (Hb) a pH controlado
A. A. Fernández G., J. E. Falcón D., G. del Toro G., A. R. Pozo D. Centro de Biofísica Médica, Universidad de Oriente

Resumen
En el estudio in vitro de determinadas enfermedades hematológicas, en especial la Anemia Drepanocítica (AD), se necesita obtener soluciones dehemoglobina (Hb) en condiciones semejantes a las fisiológicas. Una metodología muy utilizada es el lavado de los glóbulos rojos con solución buffer con el objetivo de aislarlos del resto de los constituyentes de la sangre, proporcionarle un pH constante dentro del rango fisiológico y, una vez provocada la hemólisis, obtener la solución de Hb en las condiciones deseadas. En este trabajo se compara tres delos buffer biológicos más utilizados reportados en la literatura (PBS, PBP y BSKG), obteniéndose características químicas tales como el pK, el intervalo de efecto buffer, la influencia de la temperatura sobre el pH, su estabilidad en el tiempo, así como el efecto de los mismos sobre el sistema biológico, dado por el grado de hemólisis que provocan y el número de lavados necesarios para imprimir ala solución de hemoglobina el pH deseado. Los resultados del estudio mostraron que los tres buffer pueden ser utilizados en el lavado de los glóbulos rojos, reportándose al buffer fosfato salino (PBS) como el de mejores condiciones, ya que provoca el menor grado de hemólisis y la menor variación del pH con la temperatura, que permite que en el rango de 5 a 40 ºC su pH se mantenga dentro del rangode variaciones permitidas por el organismo, que cambia de 7,35 a 7,45.

Abstract
In the in vitro study of determined hematological illnesses, especially the Sickle Cell Disease (SCD), itis needed to get (Hb) hemoglobin solutions in similar conditions to the physiologicones. A very used methodology is the washing of the red cells with buffer solution to isolate them of the remainder of the bloodconstituents, to proportion a constant pH within the physiologic range and once that the hemolysis is provoked, to get the (Hb) hemoglobin solution in the desired conditions. In this work three of the most used biological buffers are compared (PBS, PBP and BSKG), showing chemistry properties like the pK, the buffer effect interval, the influence of the temperature on pH, their stability in thetime, as well as the effect on the biological system, considering the grade of hemolysis that they provoke and the number of washings necessary in order to obtain the hemoglobin solution with the desired pH. The results of the study showed that the three buffers can be used in the red cells washing, reporting the phosphate buffer saline (PBS) as the one of the best conditions, since it provokes theleast grade of hemolysis and the least variation of the pH with the temperature, that permits that in the range from 5 to 40 ºC its pH stays within the range of variations permitted by the organism that varies from 7,35 to 7,45.

Vol. XIII, Nº 3, 2001

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Introducción
La Anemia Drepanocítica (AD), se considera un problema de salud pública y social en Cuba, donde el 3,1 % de la poblacióngeneral porta el gen de la HbS. Se distribuye principalmente en Ciudad de la Habana, Santiago de Cuba y Guantánamo /1, 2/. Se trata de una anemia hemolítica congénita de causa intracorpuscular, caracterizada por la presencia en la sangre de numerosos hematíes en forma de hoz o semiluna (drepanocitos), más rígidos y menos flexibles que los de un individuo normal, la cual se transmite con carácterautosómico recesivo y evoluciona con dolores reumatoides, osteoarticulares, úlceras en las piernas y crisis hemolíticas con períodos de bienestar intercalados /3/. Su causa es la presencia de la Hemoglobina S (HbS), una Hb mutante que presenta un intercambio de aminoácidos en su estructura proteica, y en su estado desoxigenado polimeriza en el interior de la célula para formar un gel extremadamente...