Sanger

Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Grupo: 4QM2 Sección: 3 Carrera: Químico Bacteriólogo Parasitólogo
Laboratorio de Bioquímica
Determinación de AminoácidosTerminales con Grupo Alfa Amino Libre. Método de Sanger


Introducción
Frederick Sanger introdujo la determinación de los aminoácidos con el grupo alfa amino libre en péptidos y proteínas. Empleóun reactivo de color amarillo, el 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno. Este compuesto reacciona con grupos amino libres en condiciones ligeramente alcalinas. Como resultado se forman dinitrofenil derivados.Para romper todos los enlaces peptídicos es necesario realizar una hidrólisis con ácido clorhídrico 6N, aplicando temperatura y presión. Nuestro hidrolizado contendrá por lo tanto aminoácidos libres ydinitrofenil derivados. Los derivados son extraídos con éter y se identifican por medio de cromatografía en papel.
La hemoglobina es una proteína globular, que se encuentra dentro de los glóbulosrojos y es de gran importancia fisiológica, para el aporte normal de oxígeno a los tejidos. También transporta dióxido de carbone y protones de los tejidos periféricos hasta los pulmones para serexcretados. Presenta una estructura cuaternaria, es decir, se constituye de cuatro cadenas polipeptídicas, a cada una de las cuales se une un grupo hemo, cuyo átomo de hierro es capaz de unir de formareversible una molécula de oxígeno.
Aminoácido
Distancia eluyente
Distancia mancha
DNFB
32.8 cm
20.5 cm y 26 cm
Problema
33.5 cm
20.5 cm, 24 cm y 26 cm
PHE
33.8 cm
21 cm
ALA
34 cm
23 cmVAL
33.6 cm
24 cm
GLU
33.2 cm
25 cm
El método de degradación de Edman es un método químico para la secuenciación de péptidos. La idea general es romper un aminoácido a la vez desde un extremode la cadena peptídica. Se trata al péptido con fenilisotiocianato seguido por el tratamiento con ácido trifuluoroacético. Se fija el fenilisotiocianato al amino N-terminal y en la segunda etapa se...