Sanger

Determinación del aminoácido terminal con grupo alfa amino libre.
Método de Sanger}
IFrederick Sanger, fue uno de los científicos más reconocidos de su época; este método le dio granreconocimiento mundial, recibiendo el premio nobel de química en 1958. Con el método de Sanger se determina el grupo α-amino libre de las cadenas polipeptídicas, este reacciona, con el 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno[DNFB] en un medio ligeramente alcalino, formando los DNP derivados. Una hidrólisis posterior con HCl 6N aplicando temperatura y presión provee los aminoácidos libres y dinitrofenil derivados, estosderivados pueden extraerse del hidrolizado con éter e identificarse con una cromatografía en papel. OBJETIVOS Identificar el grupo α-amino libre en la molécula de la hemoglobina con el método deSanger. RESULTADOS Con los datos obtenidos en el cromatograma, se calculan los valores de Rf mediante la siguiente expresión:
���� = ������������ ������ ������������ ������������ ������ ����������������De acuerdo a los valores obtenidos de Rf a partir de las distancias del frente del soluto y del solvente, se deduce que el aminoácido con el grupo α-amino libre en la molécula de la hemoglobina esla Valina. Se utilizo la cromatografía en papel para identificar el aminoácido con grupo α-amino terminal. En donde se colocaron estándares [DNP-derivados]. Al revelar el cromatograma se encontrarondos manchas en la corrida del problema, uno correspondiente al DNP-Valina y el otro corresponde al DNFB sin reaccionar. Hubo unas ligeras diferencias entre la corrida del problema y de los DNP-derivadoscon los que se relaciono. Estas diferencias se pueden deber a que no se haya aplicado menos cantidad de muestra problema en el cromatograma. Además el problema presento DNFB sin reaccionar, lo cualpuede deberse a un exceso de DNFB que se adiciono debido a que no se realizo una extracción correcta antes de la hidrólisis que se hizo con el fin de eliminar todo este exceso. En la literatura se...