sangre

Instituto Tecnológico de Tepic
























Introducción
La reacción en cadena de la polimerasa o PCR es una técnica de biología molecular que permite obtener un gran numero de copias partiendo de una pequeña cantidad de ADN, es por eso que se emplea para amplificar ADNs molde de difícil amplificación, aunque lo hace con la ayuda de una ADN polimerasatermoestable, en la mayoría de los casos la ADN polimerasa no realiza su trabajo porque el ADN rico en las bases G y C es de difícil amplificación, es por eso que con un análogo de la citosina se busca hacer menos estable al par de bases G:C y que esas estructuras que forman se vean debilitadas y así se pueda llevar a cabo una buena replicación de ADN ya que esto nos sirve para muchas áreas enespecifico las áreas biológicas y se vuelve un arma importante para el descubrimiento de nuevas enfermedades las cuales pueden ser atacadas por medio de algunas técnicas biológicas que además incluyen a la PCR. Se piensa desestabilizar las bases por medio del análogo de la citosina para que así la ADN polimerasa pueda hacer su trabajo de replicación y así poder obtener los productos deseados, eso sehará en PCR de tiempo real que por medio de fluorescencia nos indicara si obtuvimos el producto de interés, pero además de eso y a modo de comprobación se correrán geles de agarosa que nos indicaran si es el producto que estamos buscando, con ello podremos observar si la ADN polimerasa colocó el análogo en vez del nucleótido normal, aunque no debemos descartar la posibilidad de que la polimerasa nocoloque esta estructura que difiere de la estructura química normal de la citosina, ese es un posible problema que frecuentemente se puede presentar, también otro de los problemas con lo que nos podemos encontrar es que la concentración del análogo inhiba a la reacción es decir que sature a la enzima y no le permita hacer nada o que por lo contrario no la sature del análogo y tampoco haga eltrabajo por falta del nucleótido. Otro de los factores importantes y que se debe de tomar en cuenta es la calidad de pipeteo o la exactitud con la que se trabaje ya que de ello dependerán muchas cosas como obtener el producto que estamos buscando, un buen diseño de cebadores es indicador de una buena PCR, una de las cosas fundamentales para un buen desarrollo de PCR es la temperatura que se manejeen cada una de las etapas de desnaturalización, hibridación y extensión.








Antecedentes
La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica de biología molecular que permite obtener un gran número de copias de un fragmento específico de ADN partiendo de una pequeña cantidad. Para ello, se emplea una ADN polimerasa termoestable, una mezcla de los cuatro desoxinucleótidos, doscebadores complementarios a secuencias determinadas en las dos hebras del ADN inicial, en posiciones que definen la región de ADN a amplificar. La reacción ocurre por repetición de ciclos térmicos que consiste en tres pasos: El primer paso es la desnaturalización a alta temperatura, donde el ADN se separa en dos hebras. El segundo paso es la hibridación a temperatura relativamente baja, donde loscebadores se asientan sobre las secuencias complementarias en el ADN molde proveyendo así un punto de arranque para la polimerización enzimática, en el tercer paso, a temperatura intermedia, la polimerasa, arrancando de los cebadores, usa los cuatro nucleótidos para hacer una nueva copia de ADN. Con eso se duplica el ADN de interés en el primer ciclo, en el siguiente ciclo térmico se repitenestos ciclos, pero ahora el ADN nuevamente sintetizado en el primer ciclo también ya sirve como molde, por lo que en el segundo ciclo ya se obtienen cuatro copias. De esta manera se da una producción exponencial de la secuencia de ADN comprendida entre las posiciones definidas por los dos cebadores, así con 20-30 ciclos térmicos se obtienen varios millones de copias de la secuencia de interés.
La...