santa maria

ATLAS de HISTOLOG´
IA
VEGETAL y ANIMAL

´
´
TECNICAS HISTOLOGICAS
´
5. OBSERVACION

Pilar Molist
Manuel A. Pombal
Manuel Meg´
ıas
Depto. de Biolog´ Funcional y Ciencias de la Salud
ıa
Facultad de Biolog´
ıa
Universidad de Vigo
(Versi´n: Noviembre 2011)
o

1.

T´cnicas histol´gicas
e
o

Denominamos proceso histol´gico a una serie de m´todos y t´cnicas
o
e
eutilizados para poder estudiar las caracter´
ısticas morfol´gicas y moleculares
o
de los tejidos. Hay diversos caminos para estudiar los tejidos, es decir,
series de t´cnicas que se utilizar´n dependiendo de qu´ caracter´
e
a
e
ıstica
deseemos observar. En el siguiente esquema se muestran los m´todos y
e
t´cnicas com´nmente empleados para el procesamiento de los tejidos. Sin
e
u
embargo,hay que tener en cuenta que existen muchas variantes a estos
¸aminos su elecci´n depender´ del resultado final que queramos obtener.
c
o
a
2

Figura 1: Esquema del proceso histol´gico dicotiled´nea.
o
o
El proceso histol´gico comienza con la obtenci´n del tejido objeto de
o
o
2

estudio. En el caso de los tejidos vegetales se toman muestras de los
distintos ´rganos que componen elcuerpo de la planta, mientras que para
o
los tejidos animales podemos optar por dos opciones: coger una porci´n de
o
dicho tejido o procesar una parte, ´rgano o parte corporal, o el animal
o
completo. En cualquier caso las muestras son habitualmente fijadas con
unos soluciones l´
ıquidas que contienen unas sustancias denominadas
fijadores, las cuales mantienen las estructuras celulares ymoleculares en
sus posiciones iniciales durante el procesamiento posterior. Tambi´n
e
podemos fijar las mol´culas de los tejidos por congelaci´n r´pida. Fijar un
e
o a
tejido es como si hici´semos una fotograf´ del tejido que se
e
ıa
mantendr´ hasta su observaci´n. Sin embargo, el uso de fijadores o medios
a
o
de inclusi´n afectan a veces las caracter´
o
ısticas tisulares que queremosobservar y por tanto tenemos que recurrir a la congelaci´n para endurecer
o
el tejido para despu´s poder obtener secciones del mismo.
e
Normalmente, tras la fijaci´n se procede a incluir el tejido para
o
posteriormente obtener secciones. Cuanto m´s delgada queramos que sea
a
nuestra secci´n m´s tenemos que endurecer nuestra muestra. Esto se
o
a
consigue embebiendo el tejido con sustanciasl´
ıquidas que posteriormente
polimerizar´n (resinas) o se volver´n consistentes (ceras). Tambi´n se
a
a
e
puede conseguir el mismo efecto mediante congelaci´n r´pida. Cortes m´s
o a
a
gruesos de 40 µm se pueden cortar sin necesidad de inclusi´n usando el
o
vibratomo. Los medios de inclusi´n son normalmente no hidrosolubles por
o
lo que tenemos que sustituir el agua de los tejidos porsolventes org´nicos
a
liposolubles y posteriormente a˜adir el medio de inclusi´n.
n
o
Tras la inclusi´n o la congelaci´n se procede a cortar los tejidos. Existen
o
o
diferentes aparatos de corte que permiten conseguir secciones ultrafinas
(del orden de nanometros), semifinas (de 0.5 a 2 µm), finas (entre unas 3 y
10 µm) y gruesos (mayores a 10 µm). Estas secciones hay que procesarlas
parapoder observarlas, aunque ciertos tipos de microscop´ por ejemplo
ıa,
con contraste de fase, permiten observar tejidos sin te˜ir. Normalmente las
n
secciones se ti˜en con colorantes que son hidrosolubles, por lo que hay que
n
eliminar el medio de inclusi´n para que los colorantes pueden unirse al
o
tejido. Las secciones, secciones ultrafinas, que se observan con el
microscopio electr´nicose pueden contrastar con metales pesados, opacos a
o
los electrones, sin eliminar la resina.
Los tejidos procesados se observan con los microscopios. Existen dos
tipos b´sicos de microscopios: electr´nico y ´ptico. Los primeros permiten
a
o
o
un gran poder de resoluci´n, pudi´ndose observar caracter´
o
e
ısticas
ultraestructurales, mientras que los segundos, con menor poder de...