Sarampion

Evaluación de un ensayo de enzimoinmunoanálisis (ELISA) de captura para el diagnóstico de la infección por virus del sarampión

Evaluation of a capture enzyme-immunoassay (ELISA) for the diagnosis of measles virus

Sr. Director. El plan estratégico para la eliminación del sarampión en la Región Europea tiene como objetivo la obtención del certificado de eliminación para el año 2007. Ennuestro país se ha puesto recientemente en marcha el plan de acción para su eliminación1 . Entre los objetivos específicos del plan de España se incluye la intensificación del papel del laboratorio en la vigilancia del sarampión. Para este propósito se requiere que los laboratorios dispongan de ensayos que permitan el diagnóstico de forma fiable, asegurando la correcta identificación de los casos desarampión, y permitiendo descartar aquellos casos con los que se plantea el diagnóstico diferencial.
La forma más eficaz para realizar el diagnóstico de laboratorio del sarampión es la detección de IgM específica, que permite hacerlo de forma rápida en una sola muestra de suero, tomada entre 3 días y 4 semanas2 . Existen diversos métodos para determinar la presencia de IgM frente a sarampión,fundamentalmente de inmunofluorescencia y de enzimoinmunoanálisis (ELISA). Estos últimos métodos son los más utilizados, sobre todo por la ventaja que supone la objetividad en la interpretación de los resultados. Existe un gran número de ensayos comerciales de ELISA para la determinación de IgM frente a sarampión, que están basados en dos aproximaciones metodológicas diferentes: ELISA indirecto, en elque anticuerpos específicos son capturados mediante antígenos inmovilizados en la fase sólida, identificándose los del isotipo IgM mediante un antisuero anti-IgM, y ELISA de captura, en que los anticuerpos IgM se capturan mediante un antisuero anti-IgM humana, identificándose la IgM específica frente a sarampión añadiendo antígenos del virus, con la subsiguiente adición de un anticuerpo específico.El objetivo de este trabajo es comparar un ensayo de ELISA de captura (Light Diagnostics, EE.UU.) en su aplicación al diagnóstico de las infecciones por virus de sarampión con otro de ELISA indirecto (Enzygnost, Dade Behring, Alemania), que empleamos actualmente en nuestro laboratorio, y que ha sido previamente evaluado durante un brote de sarampión que ocurrió en Quebec, Canadá3 .
El ensayoindirecto emplea como antígeno un extracto de células infectadas por el virus, así como un control de antígeno. Las muestras se ensayan diluidas 1/40, tratándose previamente con un antisuero anti-IgG para eliminar las posibles interferencias debidas a la presencia simultánea de IgG específica y factor reumatoide. Las muestras con absorbancia neta mayor de 0,2 son consideradas positivas, y aquéllascon absorbancia entre 0,1-0,2 (equívoca) se reensayan, considerándose positivas si la absorbancia es superior a 0,1.
El ensayo de captura emplea como antígeno un recombinante de la nucleoproteína del virus del sarampión, incorporando igualmente un lisado celular como control de antígeno. Las muestras se procesan diluidas 1/200. En ambos casos se han seguido estrictamente las instrucciones de losfabricantes.
Para la comparación se han ensayado 140 muestras de suero procedentes de 90 casos de sarampión (99 muestra), 18 muestras de casos de rubéola, 14 muestras de casos de parvovirus B19 y 9 muestras de casos de dengue. Las muestras de sarampión han sido seleccionadas entre las recibidas en el Centro Nacional de Microbiología, entre 1996 y 2000. Entre las muestras de sarampión 96 eranpositivas, 11 de ellas positivas límite, en ELISA indirecto, y 3 negativas. Las muestras de rubéola, parvovirus B19 y dengue mostraban IgM específica frente a cada virus (rubéola, ELISA indirecto, Enzygnost; parvovirus B19, ELISA de captura [Biotrin, Irlanda]; dengue, ELISA de captura [PanBio, Australia], respectivamente), y eran todas negativas para IgM anti-sarampión por ELISA indirecto.
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